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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化后的蛋白做western，出现很明显的两条带，请问是二聚体吗？怎么打开成单体？
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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-06-19 21:22:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！很犀利的新虫，潜力啊，哈哈~ 2011-06-21 08:52:53
pdspjl126(金币+5): 2011-07-11 11:29:58
1、分析一下序列，看看有多少个半胱氨酸，看是否存在形成二聚体的可能。
2、如果只是想在跑胶的时候把二聚体打开，那应该不难，巯基乙醇或者DDT等还原剂应该都能做到；
3、但是想在过柱的时候始终保持单体状态就不那么容易了，恐怕要试多一些的条件，缓冲液、离子浓度、适当的还原剂等等；
4、或者过柱时在洗脱样品的时候，分小管收集，因为单体和二聚体的性质差别，有可能在洗脱的时候出来的先后顺序不同。
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pdspjl126
3楼2011-06-20 20:53:13
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普通回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 19:51:54
loading buffer中加SDS，DTT，沸水浴5min，12000rpm离心2min后上清上样试试
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2楼2011-06-20 19:34:20
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
半胱氨酸容易导致蛋白形成二聚体吗？我不太懂，刚进入生物领域，请多指教，谢谢
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4楼2011-06-21 08:30:55
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-20 20:53:13:
1、分析一下序列，看看有多少个半胱氨酸，看是否存在形成二聚体的可能。
2、如果只是想在跑胶的时候把二聚体打开，那应该不难，巯基乙醇或者DDT等还原剂应该都能做到；
3、但是想在过柱的时候始终保持单体状态就 ...

半胱氨酸容易使蛋白形成二聚体吗，我不太懂，可以给我指点一下吗
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5楼2011-06-21 08:32:09
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whb8161

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 丫头7976 at 2011-06-21 08:30:55:
半胱氨酸容易导致蛋白形成二聚体吗？我不太懂，刚进入生物领域，请多指教，谢谢

蛋白中半胱氨酸多的话在氧化条件下相互间形成二硫键导致蛋白聚集
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人生不止寂寞不已
6楼2011-06-21 10:10:55
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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)
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7楼2011-07-11 11:31:18
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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)
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8楼2011-07-11 11:37:04
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pdspjl126

禁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
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9楼2011-07-11 11:38:21
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
顶起，同样问题，同求答复。
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10楼2012-05-10 10:37:15
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