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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白纯化问题，怎样分离约35kD和26kD的条带
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sunnybear

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化问题，怎样分离约35kD和26kD的条带 已有9人参与

实验中要分离一种新的蛋白，我是通过硫酸铵沉淀，然后除盐后过DEAE阴离子柱，吸附情况很好，用NaCl梯度洗脱，最后得到含有两条带的蛋白，就是约35kD和26kD。之前过了分子筛没有分开。请问应该怎么分离？
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1楼 2010-05-12 11:38:38
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yanghong206

银虫 (小有名气)
用G-50试试
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2楼2010-05-12 13:25:46
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biogefart

木虫 (著名写手)
sunnybear(金币+1):阳离子试过不吸附，疏水柱还没试过 2010-05-13 20:22:25
相差太小，用分子筛还不如试试其他的分离方法，例如疏水或者阳离子交换
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闹太套
3楼2010-05-12 13:37:24
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
sunnybear(金币+1):这个柱子实验室还没有啊！谢谢回复。 2010-05-13 20:25:51
试试SUPERDEX75
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4楼2010-05-12 15:12:12
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biochem301

银虫 (小有名气)
sunnybear(金币+1):这个方法还没想到啊，我再查一下，谢谢！ 2010-05-13 20:24:49
富集这两种成分，用HPLC继续细分，应该可以解决问题C18反相色谱柱
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5楼2010-05-12 15:32:59
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biogefart

木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by biochem301 at 2010-05-12 15:32:59:
富集这两种成分，用HPLC继续细分，应该可以解决问题C18反相色谱柱

目前还没有适合分离这么大的蛋白的柱子
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闹太套
6楼2010-05-14 08:19:08
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muchong5577

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我又一种离心管，它的截留分子量是30kDa，我忘记是哪个公司的啦
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7楼2010-05-14 09:48:00
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-01 07:58:41
不要试图用分子筛或者超滤的方法分开差别这么小的蛋白，没有用。我的60kd和16kd的用分子筛分的效果都不好。

尝试调整Buffer的pH后再次挂柱子梯度洗脱试试，或者换用其他柱子试试。
也不要在什么条件都不改变的情况下再过一遍DEAE了，没用，分不开就是分不开。
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8楼2010-05-14 11:51:11
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vickielin

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-05-14 09:48:00:
我又一种离心管，它的截留分子量是30kDa，我忘记是哪个公司的啦

是不是 Millipore管 这个也是可以截留分子量的，就是不知道有没有这么细的规格了。
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9楼2010-08-31 20:45:45
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鼓浪听涛

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-01 07:59:05
如有条件的话，可以尝试用RP-HPLC进行分离。
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10楼2010-08-31 21:06:01
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