24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2037  |  回复: 10

sunnybear

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化问题,怎样分离约35kD和26kD的条带 已有9人参与

实验中要分离一种新的蛋白,我是通过硫酸铵沉淀,然后除盐后过DEAE阴离子柱,吸附情况很好,用NaCl梯度洗脱,最后得到含有两条带的蛋白,就是约35kD和26kD。之前过了分子筛没有分开。请问应该怎么分离?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanghong206

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

用G-50试试
2楼2010-05-12 13:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

sunnybear(金币+1):阳离子试过不吸附,疏水柱还没试过 2010-05-13 20:22:25
相差太小,用分子筛还不如试试其他的分离方法,例如疏水或者阳离子交换
闹太套
3楼2010-05-12 13:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

sunnybear(金币+1):这个柱子实验室还没有啊!谢谢回复。 2010-05-13 20:25:51
试试SUPERDEX75
4楼2010-05-12 15:12:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biochem301

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

sunnybear(金币+1):这个方法还没想到啊,我再查一下,谢谢! 2010-05-13 20:24:49
富集这两种成分,用HPLC继续细分,应该可以解决问题C18反相色谱柱
5楼2010-05-12 15:32:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by biochem301 at 2010-05-12 15:32:59:
富集这两种成分,用HPLC继续细分,应该可以解决问题C18反相色谱柱

目前还没有适合分离这么大的蛋白的柱子
闹太套
6楼2010-05-14 08:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我又一种离心管,它的截留分子量是30kDa,我忘记是哪个公司的啦
7楼2010-05-14 09:48:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-01 07:58:41
不要试图用分子筛或者超滤的方法分开差别这么小的蛋白,没有用。我的60kd和16kd的用分子筛分的效果都不好。

尝试调整Buffer的pH后再次挂柱子梯度洗脱试试,或者换用其他柱子试试。
也不要在什么条件都不改变的情况下再过一遍DEAE了,没用,分不开就是分不开。
8楼2010-05-14 11:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickielin

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-05-14 09:48:00:
我又一种离心管,它的截留分子量是30kDa,我忘记是哪个公司的啦

是不是 Millipore管 这个也是可以截留分子量的,就是不知道有没有这么细的规格了。
9楼2010-08-31 20:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鼓浪听涛

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-01 07:59:05
如有条件的话,可以尝试用RP-HPLC进行分离。
10楼2010-08-31 21:06:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunnybear 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +9 bradoner 2026-04-01 9/450 2026-04-01 22:44 by SZW_UJN
[考研] 085600 295分求调剂 +14 W55j 2026-03-30 17/850 2026-04-01 22:43 by peike
[考研] 339求调剂,想调回江苏 +7 烤麦芽 2026-03-27 10/500 2026-04-01 21:35 by 495374996
[考研] 材料调剂 +8 一样YWY 2026-04-01 8/400 2026-04-01 20:07 by jp9609
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +10 脚滑的守法公民 2026-03-27 10/500 2026-04-01 17:23 by pies112
[考研] 调剂推荐 +9 清酒714 2026-03-26 10/500 2026-04-01 16:25 by yanflower7133
[考研] 求调剂:085600材料与化工,考材科基,总分319 +17 678lucky 2026-03-31 21/1050 2026-04-01 01:40 by 1018329917
[考研] 311(085601)求调剂 +12 liziyeyeye 2026-03-28 13/650 2026-04-01 00:34 by fmesaito
[考研] 08开头看过来!!! +3 wwwwffffff 2026-03-31 5/250 2026-03-31 17:45 by 星光/
[基金申请] 面上5B能上会吗? +8 redcom 2026-03-29 8/400 2026-03-31 15:53 by niuailing
[考研] 353求调剂 +3 江上枫_26 2026-03-28 3/150 2026-03-31 15:53 by jp9609
[考研] 085601 329分调剂 +6 yzsa12 2026-03-31 6/300 2026-03-31 15:23 by yanflower7133
[考研] 生物考研337分求调剂 +4 cgxin 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:18 by 记事本2026
[考研] 0703化学 +20 妮妮ninicgb 2026-03-27 20/1000 2026-03-31 13:33 by 无际的草原
[考研] 287求调剂 +17 land xuxu 2026-03-26 17/850 2026-03-31 11:16 by Zzxxxs
[考研] 本科211总分289,08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 105500药学求调剂,一志愿山东大学药学,348分 +3 gr哈哈哈 2026-03-28 3/150 2026-03-30 18:56 by 源_2020
[考研] 322求调剂 +10 宋明欣 2026-03-27 10/500 2026-03-30 18:47 by 544594351
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
信息提示
请填处理意见