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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sunnybear

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[交流] 【求助/交流】蛋白纯化问题,怎样分离约35kD和26kD的条带 已有9人参与

实验中要分离一种新的蛋白,我是通过硫酸铵沉淀,然后除盐后过DEAE阴离子柱,吸附情况很好,用NaCl梯度洗脱,最后得到含有两条带的蛋白,就是约35kD和26kD。之前过了分子筛没有分开。请问应该怎么分离?
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yanghong206

超级版主

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用G-50试试
2楼2010-05-12 13:25:46
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biogefart

版主

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sunnybear(金币+1):阳离子试过不吸附,疏水柱还没试过 2010-05-13 20:22:25
相差太小,用分子筛还不如试试其他的分离方法,例如疏水或者阳离子交换
闹太套
3楼2010-05-12 13:37:24
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zhaocy8903

版主

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sunnybear(金币+1):这个柱子实验室还没有啊!谢谢回复。 2010-05-13 20:25:51
试试SUPERDEX75
4楼2010-05-12 15:12:12
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biochem301

实习版主

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sunnybear(金币+1):这个方法还没想到啊,我再查一下,谢谢! 2010-05-13 20:24:49
富集这两种成分,用HPLC继续细分,应该可以解决问题C18反相色谱柱
5楼2010-05-12 15:32:59
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biogefart

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by biochem301 at 2010-05-12 15:32:59:
富集这两种成分,用HPLC继续细分,应该可以解决问题C18反相色谱柱

目前还没有适合分离这么大的蛋白的柱子
闹太套
6楼2010-05-14 08:19:08
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muchong5577

兑换贵宾

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我又一种离心管,它的截留分子量是30kDa,我忘记是哪个公司的啦
7楼2010-05-14 09:48:00
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月月大可

兑换贵宾

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★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-01 07:58:41
不要试图用分子筛或者超滤的方法分开差别这么小的蛋白,没有用。我的60kd和16kd的用分子筛分的效果都不好。

尝试调整Buffer的pH后再次挂柱子梯度洗脱试试,或者换用其他柱子试试。
也不要在什么条件都不改变的情况下再过一遍DEAE了,没用,分不开就是分不开。
8楼2010-05-14 11:51:11
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vickielin

实习版主

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引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-05-14 09:48:00:
我又一种离心管,它的截留分子量是30kDa,我忘记是哪个公司的啦

是不是 Millipore管 这个也是可以截留分子量的,就是不知道有没有这么细的规格了。
9楼2010-08-31 20:45:45
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鼓浪听涛

专家顾问

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-09-01 07:59:05
如有条件的话,可以尝试用RP-HPLC进行分离。
10楼2010-08-31 21:06:01
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