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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为何我的蛋白纯化出来后有三条带？
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zhshch2009

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为何我的蛋白纯化出来后有三条带？

请问各位做过蛋白纯化的同仁：我纯化的蛋白为何洗脱出来的是三条带？应该是100KD左右的一条才对，这是什么原因？难道是被打断了？另外这三条带都比100KD小～而加起来的总和又不100KD大

[ Last edited by zhshch2009 on 2010-9-2 at 10:21 ]
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1楼 2010-09-02 10:00:43
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zhshch2009

铁虫 (小有名气)
另外这三条带都比100KD小～
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2楼2010-09-02 10:15:28
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yaojc

木虫 (正式写手)
zhshch2009(金币+1): 2010-09-02 10:29:35
是不是分解了，你是电泳检测的吗？

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 at 10:19 ]
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专注、专心、专业
3楼2010-09-02 10:17:28
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zhshch2009

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yaojc at 2010-09-02 10:17:28:
是不是分解了，你是电泳检测的吗？

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 at 10:19 ]

对的，跑的SDS-PGAE,可是我不明白如果分解了的话为什么三条带加起来大小不等于应有大小呢？
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4楼2010-09-02 10:29:23
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天
zhshch2009(金币+1): 2010-09-02 10:41:33
应该是分解了
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海到尽头天做岸，山登绝顶我为峰。
5楼2010-09-02 10:32:14
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zhshch2009

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 蓝皮鼠7983 at 2010-09-02 10:32:14:
应该是分解了

问题如上，为什么分解了之后的条带大小加起来不等于应有大小？SDS-PAGE加巯基乙醇会不会断键而分解蛋白？
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6楼2010-09-02 10:40:48
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yaojc

木虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1):鼓励新虫！ 2010-09-02 20:44:44
如果是巯基乙醇分解，那么你的蛋白有多个二硫键，断裂后加起来肯定不是原来大小，一定要大的。
巯基乙醇会导致二硫键断裂，重新跑电泳，样本处理时不加巯基乙醇看下！

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 at 10:58 ]
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专注、专心、专业
7楼2010-09-02 10:57:08
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zhshch2009

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yaojc at 2010-09-02 10:57:08:
如果是巯基乙醇分解，那么你的蛋白有多个二硫键，断裂后加起来肯定不是原来大小，一定要大的。
巯基乙醇会导致二硫键断裂，重新跑电泳，样本处理时不加巯基乙醇看下！

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 a ...

但是它是我自己构建菌株表达的蛋白，也有可能形成二硫键吗？恩！我试试！

[ Last edited by zhshch2009 on 2010-9-2 at 11:30 ]
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8楼2010-09-02 11:20:39
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)
zhshch2009(金币+1): 2010-09-02 13:20:36
我觉得是降解的可能性比较大，加入蛋白酶抑制剂试试
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天道酬勤
9楼2010-09-02 11:30:44
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zhshch2009

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wchuangqi at 2010-09-02 11:30:44:
我觉得是降解的可能性比较大，加入蛋白酶抑制剂试试

好的，谢谢！
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10楼2010-09-02 13:20:54
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