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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白分离纯化的纯品 带盐放-20度会变性吗？
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txyamy

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白分离纯化的纯品 带盐放-20度会变性吗？

如题：蛋白分离纯化的纯品 带盐放-20度会变性吗？透析后直接放-20度呢？主要想上圆二色，等温量热滴定仪等，会影响吗？请知道的xdjm们指导下呀~~

诸如：冷冻
破坏了维持蛋白质构象的作用力。
水化层破坏，基团暴露
盐效应
浓缩效应
等等

[ Last edited by txyamy on 2011-11-12 at 10:44 ]
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1楼 2011-11-12 10:40:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xinyaolu

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+4, BioEPI+1): 谢谢参与 2011-11-15 16:52:21
-20℃冷冻需要加20%或者更高浓度的甘油，使凝点降低。否则，溶液冷冻后解冻的过程中，由于局部盐浓度的过高，往往会导致蛋白析出，而析出的蛋白基本不会在溶解、有活性。所以一般蛋白在冷冻前都需要脱盐处理，外加甘油做保护剂。
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19楼2011-11-15 10:49:24
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普通回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
txyamy(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-11-15 16:49:31
跟蛋白质性质有关系，比如，抗体就不是很容易变性。
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2楼2011-11-12 10:49:02
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dumingcong

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
txyamy(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-11-15 16:49:46
蛋白质（包括酶）的性质是千差万别的，不同的蛋白质将有不同的结果。个人认为，不能一概而论，你需要认真研究同类蛋白质（酶）的相关文献报道，性质，特性等。
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3楼2011-11-12 11:52:59
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dumingcong

铜虫 (初入文坛)
有些蛋白质，非常“抗造”，有些蛋白质就非常脆弱。比如我做过的实验“氢化酶”在接触氧气几分钟，甚至几秒钟，活性就下降很大。
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4楼2011-11-12 11:55:28
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
txyamy(金币+1):谢谢参与
一般情况下 不会变性
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5楼2011-11-12 12:54:25
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159236478

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★
txyamy(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-11-12 19:15:50
txyamy(金币+5): 非常感谢！为了避免反复冻融，我可以把样品分装，或冻干成粉末哈 2011-11-12 20:34:14
silicare(BioEPI+1): 2011-11-15 16:50:21
蛋白在不脱盐的情况下，有一些金属离子可以和蛋白发生螯合作用，破坏蛋白质结构，降低蛋白存放时间！
      蛋白纯化后期，需要脱盐，也就是常说的透析！透析后放-20度，一般情况下能存放2年，至于后期试验，影响不大，但切记避免反复冻融（导致蛋白变性）
     祝君顺利，早日成功！
     回答不妥之处，大家共同学习！
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6楼2011-11-12 15:07:31
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
txyamy(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-11-15 16:50:43
引用回帖:
1楼: Originally posted by txyamy at 2011-11-12 10:40:41:
如题：蛋白分离纯化的纯品 带盐放-20度会变性吗？透析后直接放-20度呢？主要想上圆二色，等温量热滴定仪等，会影响吗？请知道的xdjm们指导下呀~~

诸如：冷冻
破坏了维持蛋白质构象的作用力。
水化层破坏，基 ...

盐浓度不大在低温下一般不会变性德。
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7楼2011-11-12 15:53:15
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
txyamy(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+2): 谢谢分享 2011-11-15 16:50:56
silicare(金币+2): 谢谢分享 2011-11-15 16:51:15
我们每周要做20多个不同蛋白  很少见到变性失活的情况
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txyamy
10楼2011-11-13 13:06:41
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youngker918

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
txyamy(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-11-15 16:51:16
很难讲，要具体看蛋白的性质。建议你在保存蛋白时加入终浓度为20%的甘油。
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txyamy
11楼2011-11-13 16:51:57
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txyamy

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by 会思想的芦苇 at 2011-11-13 13:06:41:
我们每周要做20多个不同蛋白  很少见到变性失活的情况

你好，后还想请问下蛋白组学的中的蛋白结构（如二、三级结构）是在完全不能变性的情况下才能做出的吗？看到一篇外文用到了巯基乙醇，尿素等分出来然后上的圆二色测结构，这样也可以吗？想问下你们一般用什么方法做蛋白的序列跟结构呢？这个太让我苦恼了。。。
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12楼2011-11-13 17:35:00
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txyamy

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by youngker918 at 2011-11-13 16:51:57:
很难讲，要具体看蛋白的性质。建议你在保存蛋白时加入终浓度为20%的甘油。

所有的蛋白保存都可以加甘油吗？他的主要作用是稳定作用吗？谢谢啊
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13楼2011-11-13 17:39:48
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youngker918

金虫 (正式写手)
txyamy(金币+3): 好的，非常感谢！ 2011-11-13 21:58:44
txyamy(金币+3): 好的，非常感谢！ 2011-11-13 21:58:53
silicare(BioEPI+1): 2011-11-15 16:51:35
引用回帖:
13楼: Originally posted by txyamy at 2011-11-13 17:39:48:
所有的蛋白保存都可以加甘油吗？他的主要作用是稳定作用吗？谢谢啊

都可以加的，加甘油主要有两个作用，一是降低体系的凝固点，准确地讲蛋白在负20度中并不会变性，会让蛋白变性的是反复在负20度和室温之间冻融；第二是降低体系的极性，毕竟蛋白质是个极性较低的大分子物质，降低体系的极性有助于蛋白质结构稳定
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14楼2011-11-13 19:29:30
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中油所

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-11-15 16:51:46
蛋白冷冻干燥之后放-20会好点，如果要经常用可加等量灭菌甘油
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txyamy
15楼2011-11-14 08:14:34
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txyamy

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 中油所 at 2011-11-14 08:14:34:
蛋白冷冻干燥之后放-20会好点，如果要经常用可加等量灭菌甘油

嗯嗯， 在这里学到很多，谢谢
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16楼2011-11-14 09:50:45
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 159236478 at 2011-11-12 15:07:31:
蛋白在不脱盐的情况下，有一些金属离子可以和蛋白发生螯合作用，破坏蛋白质结构，降低蛋白存放时间！
      蛋白纯化后期，需要脱盐，也就是常说的透析！透析后放-20度，一般情况下能存放2年，至于后期试验，影响 ...

你好！我想请问一下，透析脱盐是什么意思啊，是降低盐浓度吗
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17楼2011-11-14 10:51:51
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159236478

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-11-15 16:52:00
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-11-15 16:52:04
引用回帖:
17楼: Originally posted by chunmeiyang at 2011-11-14 10:51:51:
你好！我想请问一下，透析脱盐是什么意思啊，是降低盐浓度吗

是的，一般可采用透析的方法(通过盐离子的浓度差进行去除），还可采用层析G-25柱进行，给你个连接，希望有所帮助http://wenku.baidu.com/view/fb4ff54dfe4733687e21aa57.html
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18楼2011-11-15 08:39:06
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare: 没这说法 2011-11-15 16:52:38
引用回帖:
18楼: Originally posted by 159236478 at 2011-11-15 08:39:06:
是的，一般可采用透析的方法(通过盐离子的浓度差进行去除），还可采用层析G-25柱进行，给你个连接，希望有所帮助http://wenku.baidu.com/view/fb4ff54dfe4733687e21aa57.html

那蛋白不是在一定的盐离子浓度下才可溶吗
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20楼2011-11-15 13:53:16
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159236478

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by chunmeiyang at 2011-11-15 13:53:16:
那蛋白不是在一定的盐离子浓度下才可溶吗

是需要一定的离子浓度，才能让蛋白纯化，只是纯化后，蛋白需要脱盐！
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22楼2011-11-16 08:39:23
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zongqi199244

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蛋白质可以放4摄氏度，或者-80摄氏度。应为反复的冻融效果不好。防摄氏度有降解的风险，这个主要看你蛋白的性质了。
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23楼2013-08-10 11:17:28
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jinpeng_61188楼
2011-11-12 19:55   回复  
txyamy(金币+1):谢谢参与
zhoupeng879楼
2011-11-12 20:21   回复  
txyamy(金币+1):谢谢参与
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牛奶可乐21楼
2011-11-15 16:32   回复  
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