24小时热门版块排行榜    

查看: 2233  |  回复: 20

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为何我的蛋白纯化出来后有三条带?

请问各位做过蛋白纯化的同仁:我纯化的蛋白为何洗脱出来的是三条带?应该是100KD左右的一条才对,这是什么原因?难道是被打断了?另外这三条带都比100KD小~而加起来的总和又不100KD大

[ Last edited by zhshch2009 on 2010-9-2 at 10:21 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

另外这三条带都比100KD小~
2楼2010-09-02 10:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaojc

木虫 (正式写手)

zhshch2009(金币+1): 2010-09-02 10:29:35
是不是分解了,你是电泳检测的吗?

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 at 10:19 ]
专注、专心、专业
3楼2010-09-02 10:17:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yaojc at 2010-09-02 10:17:28:
是不是分解了,你是电泳检测的吗?

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 at 10:19 ]

对的,跑的SDS-PGAE,可是我不明白如果分解了的话为什么三条带加起来大小不等于应有大小呢?
4楼2010-09-02 10:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天

zhshch2009(金币+1): 2010-09-02 10:41:33
应该是分解了
海到尽头天做岸,山登绝顶我为峰。
5楼2010-09-02 10:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 蓝皮鼠7983 at 2010-09-02 10:32:14:
应该是分解了

问题如上,为什么分解了之后的条带大小加起来不等于应有大小?SDS-PAGE加巯基乙醇会不会断键而分解蛋白?
6楼2010-09-02 10:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaojc

木虫 (正式写手)


amisking(金币+1):鼓励新虫! 2010-09-02 20:44:44
如果是巯基乙醇分解,那么你的蛋白有多个二硫键,断裂后加起来肯定不是原来大小,一定要大的。
巯基乙醇会导致二硫键断裂,重新跑电泳,样本处理时不加巯基乙醇看下!

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 at 10:58 ]
专注、专心、专业
7楼2010-09-02 10:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yaojc at 2010-09-02 10:57:08:
如果是巯基乙醇分解,那么你的蛋白有多个二硫键,断裂后加起来肯定不是原来大小,一定要大的。
巯基乙醇会导致二硫键断裂,重新跑电泳,样本处理时不加巯基乙醇看下!

[ Last edited by yaojc on 2010-9-2 a ...

但是它是我自己构建菌株表达的蛋白,也有可能形成二硫键吗?恩!我试试!

[ Last edited by zhshch2009 on 2010-9-2 at 11:30 ]
8楼2010-09-02 11:20:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wchuangqi

铜虫 (小有名气)

zhshch2009(金币+1): 2010-09-02 13:20:36
我觉得是降解的可能性比较大,加入蛋白酶抑制剂试试
天道酬勤
9楼2010-09-02 11:30:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhshch2009

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wchuangqi at 2010-09-02 11:30:44:
我觉得是降解的可能性比较大,加入蛋白酶抑制剂试试

好的,谢谢!
10楼2010-09-02 13:20:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhshch2009 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +7 吃宵夜1 2026-02-28 9/450 2026-02-28 19:15 by 公瑾逍遥
[考博] 博士推荐 +5 花儿笑? 2026-02-21 6/300 2026-02-28 18:53 by nxgogo
[考研] 298求调剂 +6 人间唯你是清欢 2026-02-28 8/400 2026-02-28 18:52 by 人间唯你是清欢
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +7 南迦720 2026-02-28 7/350 2026-02-28 18:28 by leonnulll
[考研] 材料学调剂 +4 提神豆沙包 2026-02-28 4/200 2026-02-28 18:26 by houyaoxu
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +3 ieewxg 2026-02-25 3/150 2026-02-28 18:25 by addressing
[教师之家] 版面费该交吗 +15 苹果在哪里 2026-02-22 18/900 2026-02-28 18:20 by mibaomingg
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[考研] 材料类求调剂 +4 wana_kiko 2026-02-28 4/200 2026-02-28 18:08 by djennjx
[考研] 材料调剂 +3 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 3/150 2026-02-28 18:06 by houyaoxu
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +3 弗格个 2026-02-28 5/250 2026-02-28 17:04 by sandychj
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考博] 26申博 +3 想申博! 2026-02-26 3/150 2026-02-28 16:07 by nxgogo
[考研] 290求调剂 +4 材料专硕调剂; 2026-02-28 5/250 2026-02-28 13:32 by houyaoxu
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[基金申请] 什么是人一生最重要的? +10 瞬息宇宙 2026-02-21 10/500 2026-02-27 08:46 by tfang
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见