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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变引物设计

现在想做定点突变,只有一个位点的突变,利用高保真酶和dnpi酶消化的方法。请教下,设计的引物是完全互补的一对引物,这样不是形成引物二聚体了吗?小白,请教高手。
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-10 13:53:05
以质粒做模板,点突变,引物的设计不是完全互补的。
你这种方法不知道是不是扩增两个片段,然后overlap,这样设计的时候,完全互补的那对引物不是一起用的,而是一条是上游片段的下游引物,一条是下游片段的上游引物。
Thank-you,so-blue.
2楼2012-05-10 11:08:23
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-10 11:08:23:
以质粒做模板,点突变,引物的设计不是完全互补的。
你这种方法不知道是不是扩增两个片段,然后overlap,这样设计的时候,完全互补的那对引物不是一起用的,而是一条是上游片段的下游引物,一条是下游片段的上游 ...

你说的是另外一种方法,我看分子克隆书上介绍的高保真酶和dnpi酶消化的方法,设计的引物是完全互补的一对引物。
3楼2012-05-10 12:00:32
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c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-10 13:53:20
陈帅印: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-12 18:17:48
设计一对完全互补的引物,不要担心引物二聚体,这些是不可能避免的,但在变性温度下他们会解开双链,退火时虽然有二聚体,但也有一部分不是二聚体,所以获得产物比较少,直接用于转化,一般用电泳检测不出来。
4楼2012-05-10 12:25:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 专家考核 2012-05-10 13:53:25
是一对完全互补的引物,形成引物二聚体但不会影响你的实验结果的。
5楼2012-05-10 12:52:00
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
6楼2012-06-17 07:37:11
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箫箫客

银虫 (小有名气)

你们做定点突变不用定点突变试剂盒吗,最近我也做定点突变,想买定点突变试剂盒,不过好贵的,不知道你们不用试剂盒怎么做,想知道
7楼2013-11-13 21:38:23
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

8楼2015-04-19 21:36:20
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hanhanxp

新虫 (初入文坛)

我也有同样的疑惑,请问楼主知道问题的答案了吗?
9楼2015-05-25 17:46:35
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