应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变引物设计
91/1返回列表
查看: 3588  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

陈帅印

铁虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变引物设计

现在想做定点突变，只有一个位点的突变，利用高保真酶和dnpi酶消化的方法。请教下，设计的引物是完全互补的一对引物，这样不是形成引物二聚体了吗？小白，请教高手。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-10 10:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-10 13:53:05
以质粒做模板，点突变，引物的设计不是完全互补的。
你这种方法不知道是不是扩增两个片段，然后overlap，这样设计的时候，完全互补的那对引物不是一起用的，而是一条是上游片段的下游引物，一条是下游片段的上游引物。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2012-05-10 11:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈帅印

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-10 11:08:23:
以质粒做模板，点突变，引物的设计不是完全互补的。
你这种方法不知道是不是扩增两个片段，然后overlap，这样设计的时候，完全互补的那对引物不是一起用的，而是一条是上游片段的下游引物，一条是下游片段的上游 ...

你说的是另外一种方法，我看分子克隆书上介绍的高保真酶和dnpi酶消化的方法，设计的引物是完全互补的一对引物。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-10 12:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-10 13:53:20
陈帅印: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-12 18:17:48
设计一对完全互补的引物，不要担心引物二聚体，这些是不可能避免的，但在变性温度下他们会解开双链，退火时虽然有二聚体，但也有一部分不是二聚体，所以获得产物比较少，直接用于转化，一般用电泳检测不出来。
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-10 12:25:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 专家考核 2012-05-10 13:53:25
是一对完全互补的引物，形成引物二聚体但不会影响你的实验结果的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-10 12:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2012-06-17 07:37:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

箫箫客

银虫 (小有名气)
你们做定点突变不用定点突变试剂盒吗，最近我也做定点突变，想买定点突变试剂盒，不过好贵的，不知道你们不用试剂盒怎么做，想知道
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-11-13 21:38:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-04-19 21:36:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanhanxp

新虫 (初入文坛)
我也有同样的疑惑，请问楼主知道问题的答案了吗？
赞一下 回复此楼
9楼2015-05-25 17:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 陈帅印 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭