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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变引物设计
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变引物设计

现在想做定点突变，只有一个位点的突变，利用高保真酶和dnpi酶消化的方法。请教下，设计的引物是完全互补的一对引物，这样不是形成引物二聚体了吗？小白，请教高手。
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1楼 2012-05-10 10:39:30
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 专家考核 2012-05-10 13:53:25
是一对完全互补的引物，形成引物二聚体但不会影响你的实验结果的。
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5楼2012-05-10 12:52:00
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-10 13:53:05
以质粒做模板，点突变，引物的设计不是完全互补的。
你这种方法不知道是不是扩增两个片段，然后overlap，这样设计的时候，完全互补的那对引物不是一起用的，而是一条是上游片段的下游引物，一条是下游片段的上游引物。
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Thank-you，so-blue.
2楼2012-05-10 11:08:23
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-10 11:08:23:
以质粒做模板，点突变，引物的设计不是完全互补的。
你这种方法不知道是不是扩增两个片段，然后overlap，这样设计的时候，完全互补的那对引物不是一起用的，而是一条是上游片段的下游引物，一条是下游片段的上游 ...

你说的是另外一种方法，我看分子克隆书上介绍的高保真酶和dnpi酶消化的方法，设计的引物是完全互补的一对引物。
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3楼2012-05-10 12:00:32
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c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-10 13:53:20
陈帅印: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-12 18:17:48
设计一对完全互补的引物，不要担心引物二聚体，这些是不可能避免的，但在变性温度下他们会解开双链，退火时虽然有二聚体，但也有一部分不是二聚体，所以获得产物比较少，直接用于转化，一般用电泳检测不出来。
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4楼2012-05-10 12:25:49
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