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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】扩的片段发生突变了 怎么再突变回来
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yinsongna

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】扩的片段发生突变了 怎么再突变回来 已有8人参与

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1楼 2010-05-19 09:58:37
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jasco

木虫 (正式写手)
★
yinsongna(金币+1): 2010-05-19 11:29:52
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-19 18:54:53
突变试剂盒，或者突变处合成引物，通过串联pcr修复，

最简单的是重新扩增
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2楼2010-05-19 11:27:07
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-05-19 11:27:07:
突变试剂盒，或者突变处合成引物，通过串联pcr修复，

最简单的是重新扩增

重新合成太费劲了 突变试剂盒貌似很贵，麻烦你可不可以给我说下突变处合成引物，是不是就是在突变的地方设计引物，然后重叠延伸PCR再做链接？
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3楼2010-05-19 11:31:19
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lzhwin

木虫 (正式写手)
yinsongna(金币+1): 2010-05-19 12:43:49
不懂，既然是扩增突变，说明模板应该没问题吧？
重新扩一次不就行了
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4楼2010-05-19 11:33:07
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霖希

★
amisking(金币+1):good！ 2010-05-19 12:32:37
yinsongna(金币+1): 2010-05-19 12:44:20
看你有几个突变位点了，要是2个以上，还是重新扩增的合适，要是一个位点突变了，再定点突变回来就行了，定点突变就是在突变的地方重新设计一对引物，应该有文献里有，具体的你得查查，一下也说不清。
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5楼2010-05-19 11:37:37
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2010-05-19 11:33:07:
不懂，既然是扩增突变，说明模板应该没问题吧？
重新扩一次不就行了

太费劲了
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6楼2010-05-19 12:44:04
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
yinsongna(金币+1): 2010-05-19 19:52:05
点突变吧。如果很多个突变，建议重新做一下。我也遇到过，好在是在引物端，延长引物后居然“盖”过去了。
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7楼2010-05-19 13:05:41
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银杏下

金虫 (小有名气)
yinsongna(金币+1): 2010-05-19 19:52:53
很明显重新扩增要方便得多，点突变做起来伤钱伤时间。
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8楼2010-05-19 15:39:35
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lzhwin

木虫 (正式写手)
yinsongna(金币+1): 2010-05-19 19:53:12
楼主的模板很珍贵或者很难得到吗？
点突变要重新设计引物，经过一轮超长时间的PCR，还要消化模板再转化、筛选，最后测序（还有可能错）。也算是个中等规模的实验了。

请楼主详细说明一下，重新扩增为什么比点突变麻烦？你只需要用原来的模板加上高保真酶重新做一次PCR，然后回收连接转化鉴定测序整个下来一周就OK了啊？

[ Last edited by lzhwin on 2010-5-19 at 17:11 ]
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9楼2010-05-19 17:00:41
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
重叠延伸pcr重新突变回去。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
10楼2010-05-19 17:21:21
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