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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：如何确定是否有移码突变
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yxybaby

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：如何确定是否有移码突变

我构建了一个pet32a的原核载体，插入片段1000bp，是一段cDNA序列，有atg的。双酶切xho1和bamh1,双酶切已经鉴定成功并将菌液送测序，用的载体t7引物，测序结果与原序列比对一致，但不知在载体中是否有移码突变？要做原核表达。请大家帮忙解答。
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1楼 2011-06-14 16:07:48
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)
顶贴，跟进，学习
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2楼2011-06-14 16:36:18
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-14 18:57:30
yxybaby(金币+5): 谢谢，这就去看 2011-06-14 20:03:51
pet32a是融合表达的，只要BamHI酶切位点前面，XhoI在后面，而且你的序列中BamHI酶切位点后没有多余碱基或者是多余碱基3的倍数就没有移码突变。
简单的，去看看图谱就知道了。
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3楼2011-06-14 18:04:59
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zgb1982

木虫 (正式写手)
顶，一同学习，其实我不太明白，表达载体里没有内含子的吗，是不是从载体的第一位开始全部都要翻译出氨基酸呢
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4楼2011-06-14 21:32:37
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-06-14 21:32:37:
顶，一同学习，其实我不太明白，表达载体里没有内含子的吗，是不是从载体的第一位开始全部都要翻译出氨基酸呢

不是这样的。载体里面有个用来表达外源蛋白的读码框，从读码框的第一个ATG（起始密码子）开始翻译，一直到终止密码子。
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5楼2011-06-15 07:44:47
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zhcosa

金虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-06-15 11:04:43
载体上有起始密码子，LZ不必自己加ATG。翻译时从载体的ATG开始翻译。如果LZ不放心，可以把载体上这段序列测序，然后翻译一下，看看是不是能产生正常的蛋白。
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6楼2011-06-15 08:18:52
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pc1453

金虫 (小有名气)
你的问题解决了吗，我现在也是这个类似问题，可以教我一下吗
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7楼2019-01-24 17:10:22
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