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yxybaby

银虫 (小有名气)

[求助] 求助:如何确定是否有移码突变

我构建了一个pet32a的原核载体,插入片段1000bp,是一段cDNA序列,有atg的。双酶切xho1和bamh1,双酶切已经鉴定成功并将菌液送测序,用的载体t7引物,测序结果与原序列比对一致,但不知在载体中是否有移码突变?要做原核表达。请大家帮忙解答。
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

顶贴,跟进,学习
2楼2011-06-14 16:36:18
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-14 18:57:30
yxybaby(金币+5): 谢谢,这就去看 2011-06-14 20:03:51
pet32a是融合表达的,只要BamHI酶切位点前面,XhoI在后面,而且你的序列中BamHI酶切位点后没有多余碱基或者是多余碱基3的倍数就没有移码突变。
简单的,去看看图谱就知道了。
3楼2011-06-14 18:04:59
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zgb1982

木虫 (正式写手)

顶,一同学习,其实我不太明白,表达载体里没有内含子的吗,是不是从载体的第一位开始全部都要翻译出氨基酸呢
4楼2011-06-14 21:32:37
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-06-14 21:32:37:
顶,一同学习,其实我不太明白,表达载体里没有内含子的吗,是不是从载体的第一位开始全部都要翻译出氨基酸呢

不是这样的。载体里面有个用来表达外源蛋白的读码框,从读码框的第一个ATG(起始密码子)开始翻译,一直到终止密码子。
5楼2011-06-15 07:44:47
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zhcosa

金虫 (小有名气)

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-06-15 11:04:43
载体上有起始密码子,LZ不必自己加ATG。翻译时从载体的ATG开始翻译。如果LZ不放心,可以把载体上这段序列测序,然后翻译一下,看看是不是能产生正常的蛋白。
6楼2011-06-15 08:18:52
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pc1453

金虫 (小有名气)

你的问题解决了吗,我现在也是这个类似问题,可以教我一下吗
7楼2019-01-24 17:10:22
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