应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？
111/1返回列表
查看: 6189  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？

准备开始做原核异源表达，设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？
有没有什么好的方法检测，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-27 12:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

walhp05

金虫 (正式写手)
拿BB
回复此楼
2楼2011-02-27 13:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2): 鼓励热心的虫友 2011-02-28 10:04:18
楼主用的是哪个载体？pet28a还是其他的。。？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-02-27 13:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by walhp05 at 2011-02-27 13:17:13:
拿BB

是何意思啊》？
回复此楼
4楼2011-02-27 13:49:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-02-27 13:22:17:
楼主用的是哪个载体？pet28a还是其他的。。？

是pET29a，可以指导下吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-02-27 13:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
楼主加入酶切位点后可以翻译一下，特别是用NCOI 酶切位点，容易移码，楼主可以在网上搜一下，有关于这种酶的注意事项！
赞一下 回复此楼
6楼2011-02-27 17:53:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxt86

金虫 (小有名气)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2): good 2011-02-28 10:04:58
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-02-28 22:00:55
到网上查一下图谱  图谱上有酶切位点，还有碱基对应翻译的氨基酸
使用Nco I、  Sal I 、  Hind III 、Xho I  都容易移位 要好好数一下
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-02-27 18:19:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)
一般引物设计要根据图谱添加或减少碱基然后额外加上没切位点，没啥好的方法
赞一下 回复此楼
8楼2011-02-28 03:10:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuyucool

铁杆木虫 (著名写手)
连接完后测序
回复此楼
9楼2011-02-28 10:23:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-02-28 22:00:46
每个载体都有序列图谱的，Taq的翻译的读码框应该能反应在酶切位点上，具体的就是三个相连的碱基，根据酶切位点于ATG的位置，选择添加保护碱基吧，保证ATG落入TAQ的翻译框就行。
当然如果是末端的Taq，则在突变终止密码子后，保证以上的事情！
赞一下 回复此楼
10楼2011-02-28 13:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱科学2012

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by sutao1979 at 2011-02-28 03:10:13
一般引物设计要根据图谱添加或减少碱基然后额外加上没切位点，没啥好的方法

请问怎么额外添加碱基？额外碱基会不会使得目的蛋白多几个氨基酸出来，导致表达的蛋白没有活性...  请您指教一下
赞一下 回复此楼
11楼2013-12-11 23:15:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoyu1014126 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 工科273调剂 +4 X1999 2026-04-09 5/250 2026-04-09 16:05 by wp06
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +5 Ytyt11 2026-04-09 6/300 2026-04-09 14:40 by Ytyt11
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +8 bradoner 2026-04-08 9/450 2026-04-09 13:43 by only周
[考研] 一志愿2110，化学学硕310分，本科重点双非求调剂 +15 努力奋斗112 2026-04-08 15/750 2026-04-09 11:22 by lenovolsw
[考研] 280求调剂 +5 兮兮夜夜 2026-04-09 8/400 2026-04-09 11:15 by 兮兮夜夜
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 320分人工智能调剂 +9 振—TZ 2026-04-03 10/500 2026-04-08 19:56 by 振—TZ
[考研] 一志愿华东理工085601材料工程303分求调剂 +15 a1708 2026-04-06 15/750 2026-04-08 16:23 by luoyongfeng
[考研] 259求调剂 +5 就爱吃土豆呀呀 2026-04-07 5/250 2026-04-07 22:40 by JourneyLucky
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
[考研] 08专硕275调剂 +5 AaAa7420 2026-04-05 5/250 2026-04-05 18:01 by jkddd
[考研] 358求调剂 +7 秋gk 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:29 by huangmoli
[考研] 319求调剂 +4 星星不眨眼喽 2026-04-03 4/200 2026-04-04 16:25 by 中飞院空管学院�
[考研] 求调剂，一志愿南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-04-03 10/500 2026-04-04 09:01 by T可可西里T
[考研] 考研调剂 +3 15615482637 2026-04-03 3/150 2026-04-03 22:50 by ms629
[考研] 一志愿中国石油大学化学工程323分求调剂 +4 化工专硕323分 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:12 by dongzh2009
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭