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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 设计引物时引入了同尾酶，怎么办
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_然然

金虫 (正式写手)

[求助] 设计引物时引入了同尾酶，怎么办

之前设计引物没考虑过同尾酶的问题。所以用设计的引物pcr扩增，酶切连接后，测序，发现是反向连接，才发现设计的引物 上游是SalI ，下游是XhoI 。
然后挑了好多次单菌落了，都是反连。想问一下同尾酶在连接时有优势性吗？  如果没有的话，我是不是可以尝试把单菌落都挑了，然后pcr，看能否酶切开呢。
谢谢
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1楼 2012-09-13 10:31:45
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diandong

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2012-09-13 16:46:20
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by diandong at 2012-09-13 16:46:20
使用同尾酶可以节省酶的使用，再鉴定时需要用上游的其他酶。

这个怎么理解呀？
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3楼2012-09-14 14:37:57
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xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新做吧！我认为有些片段就是容易偏好连接成反向，所以还是重新设计新的引物，用其它酶切位点吧！
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4楼2012-09-14 15:50:47
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuyihui2001 at 2012-09-14 15:50:47
重新做吧！我认为有些片段就是容易偏好连接成反向，所以还是重新设计新的引物，用其它酶切位点吧！

恩 已经重新设计引物了 呵呵
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5楼2012-09-15 09:12:38
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wutidenggao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

唉，我就不能重新设引物了，载体上就那么几个酶切位点，片段中还占用了一部分，只能用同尾酶做了，我只有多挑一途了
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将有限化为无限
6楼2012-11-01 20:59:44
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wutidenggao at 2012-11-01 20:59:44
唉，我就不能重新设引物了，载体上就那么几个酶切位点，片段中还占用了一部分，只能用同尾酶做了，我只有多挑一途了

我头开始也是这么想的 不过做了两手准备 换酶切位点重新做还有就是继续挑单克隆，不过感觉它连接有倾向性，可能跟目的片段有关吧 现在是换了酶切位点之后已经做出来了  你的情况很复杂，好运！
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7楼2012-11-02 09:14:37
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