应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 设计引物时引入了同尾酶，怎么办
71/1返回列表
查看: 1589  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

_然然

金虫 (正式写手)

[求助] 设计引物时引入了同尾酶，怎么办

之前设计引物没考虑过同尾酶的问题。所以用设计的引物pcr扩增，酶切连接后，测序，发现是反向连接，才发现设计的引物 上游是SalI ，下游是XhoI 。
然后挑了好多次单菌落了，都是反连。想问一下同尾酶在连接时有优势性吗？  如果没有的话，我是不是可以尝试把单菌落都挑了，然后pcr，看能否酶切开呢。
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-13 10:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diandong

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2012-09-13 16:46:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by diandong at 2012-09-13 16:46:20
使用同尾酶可以节省酶的使用，再鉴定时需要用上游的其他酶。

这个怎么理解呀？
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-14 14:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新做吧！我认为有些片段就是容易偏好连接成反向，所以还是重新设计新的引物，用其它酶切位点吧！
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-14 15:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuyihui2001 at 2012-09-14 15:50:47
重新做吧！我认为有些片段就是容易偏好连接成反向，所以还是重新设计新的引物，用其它酶切位点吧！

恩 已经重新设计引物了 呵呵
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-15 09:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wutidenggao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

唉，我就不能重新设引物了，载体上就那么几个酶切位点，片段中还占用了一部分，只能用同尾酶做了，我只有多挑一途了
赞一下 回复此楼
将有限化为无限
6楼2012-11-01 20:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wutidenggao at 2012-11-01 20:59:44
唉，我就不能重新设引物了，载体上就那么几个酶切位点，片段中还占用了一部分，只能用同尾酶做了，我只有多挑一途了

我头开始也是这么想的 不过做了两手准备 换酶切位点重新做还有就是继续挑单克隆，不过感觉它连接有倾向性，可能跟目的片段有关吧 现在是换了酶切位点之后已经做出来了  你的情况很复杂，好运！
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-02 09:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 _然然 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +14 花田半亩～白 2026-04-21 14/700 2026-04-22 21:36 by sw_as1234
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人！！！ +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭