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sootiey

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆基因可以用起始位点上游或终止位点后面的碱基设计引物吗?

正在作克隆,可以用起始位点上游或终止位点后面的碱基设计引物吗?按照常规的方法采用前后的约20bp,会有大量的引物二聚体和错配出现,目的条带很弱。
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


古可ぷ: 金币+1, 谢谢交流 2013-03-03 10:23:50
后面如果不连tag就无所谓,前面得话要保证rbs和ATG距离,另外RBS之前序列也对翻译水平有影响。
2楼2013-03-02 22:19:44
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sootiey

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-03-02 22:19:44
后面如果不连tag就无所谓,前面得话要保证rbs和ATG距离,另外RBS之前序列也对翻译水平有影响。

我只需要在ATG前加几个bp减小引物二聚体或错配就可以了,应该不会对翻译有影响吧
3楼2013-03-03 09:58:15
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

rbs距离超过10个bp活性会指数下降,我不知道你最终在质粒上怎么设计的
引物设计可以借助软件,不一定非要20bp,PCR也可以提高退火温度,+DMSO
4楼2013-03-03 11:31:24
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