24小时热门版块排行榜    

查看: 1586  |  回复: 4

lykyoung

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问能不能仅克隆单一基因的一小片段

你好,我是做克隆的新手,我想克隆逆转录病毒MLV的pol 基因的一小片段,不知道分子克隆所说的目的基因是不是必须要是一整个基因,还是基因的一小部分也可以,但是如果仅克隆基因的一小片段的话,没有启动密码子和终止密码子怎么办,可以自己加入么,如果加入的话,是不是加在酶切位点的内部,即pcr时 引物的设计包括:“保护碱基+酶切位点+起始密码+互补碱基”
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖 2011-10-30 22:24:18
你要表达么?要表达就选择表达载体质粒,可以不用自己加启动子和终止子,
你克隆的目的是啥?序列是随意的,不必要是整个基因,甚至是你自己可以随机合成的序列,
2楼2011-10-29 21:37:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lykyoung

新虫 (初入文坛)

是的,我是想表达整合酶蛋白,用的载体是克隆载体pcDNA3.1,但是不加启动子和终止子的话,怎么进行表达呢?是直接在多克隆位点插入就可以表达了么?谢谢你,希望得到你的帮助
3楼2011-10-30 20:06:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励专家应助回帖! 2011-10-31 12:32:42
质粒设计时都需要加入启动子序列,以保证目的基因的表达。启动子可分为诱导型启动子和组成型启动子两大类,后者包括CMV,SV40,T7, pMC1,PGK启动子等

pcDNA 3.1 采用的启动子是CMV
CMV DNA只有一个单向性的IE启动子复合体,可指导多个基因的表达
4楼2011-10-31 00:41:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励交流! 2011-10-31 12:32:58
用载体表达,一般可以用它的启动子和起始密码子,为了不表达后面多余的片段,你可以在下游引物上加上终止密码子
寻找方向,前进
5楼2011-10-31 10:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lykyoung 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见