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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 请问能不能仅克隆单一基因的一小片段
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lykyoung

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问能不能仅克隆单一基因的一小片段

你好，我是做克隆的新手，我想克隆逆转录病毒MLV的pol 基因的一小片段，不知道分子克隆所说的目的基因是不是必须要是一整个基因，还是基因的一小部分也可以，但是如果仅克隆基因的一小片段的话，没有启动密码子和终止密码子怎么办，可以自己加入么，如果加入的话，是不是加在酶切位点的内部，即pcr时 引物的设计包括：“保护碱基+酶切位点+起始密码+互补碱基”
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1楼 2011-10-29 21:32:30
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流! 2011-10-31 12:32:58
用载体表达，一般可以用它的启动子和起始密码子，为了不表达后面多余的片段，你可以在下游引物上加上终止密码子
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寻找方向，前进
5楼2011-10-31 10:05:35
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖 2011-10-30 22:24:18
你要表达么？要表达就选择表达载体质粒，可以不用自己加启动子和终止子，
你克隆的目的是啥？序列是随意的，不必要是整个基因，甚至是你自己可以随机合成的序列，
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2楼2011-10-29 21:37:58
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lykyoung

新虫 (初入文坛)
是的，我是想表达整合酶蛋白，用的载体是克隆载体pcDNA3.1，但是不加启动子和终止子的话，怎么进行表达呢？是直接在多克隆位点插入就可以表达了么？谢谢你，希望得到你的帮助
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3楼2011-10-30 20:06:17
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励专家应助回帖! 2011-10-31 12:32:42
质粒设计时都需要加入启动子序列，以保证目的基因的表达。启动子可分为诱导型启动子和组成型启动子两大类，后者包括CMV，SV40，T7, pMC1，PGK启动子等

pcDNA 3.1 采用的启动子是CMV
CMV DNA只有一个单向性的IE启动子复合体，可指导多个基因的表达
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4楼2011-10-31 00:41:35
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