| 查看: 2336 | 回复: 17 | |||
feitianrenwo木虫 (著名写手)
|
[交流]
【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案 已有10人参与
|
||
|
求助基因克隆方面的问题解决方案 本人正在克隆一个微生物的一个基因，设计简并引物扩增基因组DNA，获得了几个DNA片段，在NCBI里比对，与一些微生物的同源性达到80%以上，我想知道有了这些DNA片段的序列，如何知道相应的氨基酸序列呢？然后如何得到该基因的全长？（已经知道没有内含子） |
回复此楼» 猜你喜欢
308求调剂
已经有4人回复
-
NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗
已经有14人回复
-
材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐
已经有6人回复
-
化学调剂0703
已经有7人回复
-
327求调剂
已经有11人回复
-
调剂
已经有8人回复
-
梁成伟老师课题组欢迎你的加入
已经有7人回复
-
伙伴们，祝我生日快乐吧
已经有24人回复
-
中科院材料273求调剂
已经有3人回复
-
材料工程专硕274一志愿211求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助-基因克隆及引物设计的问题
已经有6人回复
- 重金求助基因克隆与功能验证方向 中文摘要350字左右翻译成英语 急！ 急！ 急！在线等
已经有3人回复
- 求助-基因克隆有关方面内容
已经有8人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。
已经有8人回复
- 【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法
已经有14人回复
- 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来
已经有11人回复
- 【求助/交流】加急~~~求助：关于基因克隆与表达引物设计的问题！希望高人指点！
已经有3人回复
- 【求助】求教基因克隆中的引物设计问题【有效期至2010年11月18日】
已经有6人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌某段基因的克隆问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于基因克隆写文章的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】基因克隆问题求助！
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因克隆实验为非目的片段？
已经有27人回复
- 【求助/交流】目的基因克隆总不成功
已经有5人回复
- 【求助/交流】有关蛋白纯化及其基因克隆的问题！请大家帮助！
已经有10人回复
2楼2010-05-14 19:57:24
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-14 21:16:28
feitianrenwo(金币+3): 2010-05-15 09:44:14
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-16 09:44:35
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-14 21:16:28
feitianrenwo(金币+3): 2010-05-15 09:44:14
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-16 09:44:35
|
首先楼主要说明白，获得的片段是从头到尾的，还是只是一部分，就是说楼主要说明白引物是怎么设计的，在什么位置设计的，明确这一点的目的是要知道是否包含完整的阅读框。 如果楼主PCR所用引物比较靠近两端，就是说基本能包含完整的阅读框，那么直接使用NCBI的ORF fineder就可以了，可以直接找到整个开放阅读框，并且翻译出氨基酸序列，包含起始密码子和终止密码子 |
3楼2010-05-14 20:39:21
feitianrenwo
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2034.4
- 散金: 155
- 红花: 1
- 帖子: 1219
- 在线: 99.9小时
- 虫号: 157372
- 注册: 2006-01-05
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
4楼2010-05-15 09:52:57
5楼2010-05-15 10:20:08
6楼2010-05-15 10:59:30
feitianrenwo
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2034.4
- 散金: 155
- 红花: 1
- 帖子: 1219
- 在线: 99.9小时
- 虫号: 157372
- 注册: 2006-01-05
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
7楼2010-05-15 11:10:58
8楼2010-05-15 19:18:20
lingn
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1785.8
- 散金: 1
- 帖子: 745
- 在线: 44.7小时
- 虫号: 1008653
- 注册: 2010-04-29
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
9楼2010-05-15 19:49:39
entomology557
铁杆木虫 (知名作家)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 9250.2
- 散金: 359
- 红花: 9
- 帖子: 5382
- 在线: 289.7小时
- 虫号: 482767
- 注册: 2007-12-26
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
★ ★ ★ ★
feitianrenwo(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-15 21:58:31
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-16 09:44:11
feitianrenwo(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-15 21:58:31
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-16 09:44:11
| 恩，8k是有点难弄的，需要摸摸条件，不是一次性就能很顺利出来的。当然根据同源保守序列设计的引物跑出来的产物也不一定对的，需要不断的测序，上ncbi比对，如果比对结果和预期相符再考虑race或walking，没有全基因组或转录组数据拿全长是需要花费不少时间的，特别是你这么长的序列。当然你说的翻译啥的不用考虑太多吧，直接上blastx，tblastx等就会自动帮你翻译去比对蛋白了，这个不是问题，关键是先要保证p出来的片段测序后是自己需要的目的基因上的，才能往下继续调整后获取全长 |
10楼2010-05-15 21:23:42
