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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。
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紫色云梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。 已有8人参与

最近被实验搞得头都大了，导师让做MHC基因克隆，现在还在中间目的片段的扩增阶段，设计了很多引物，中间只有偶尔一两次扩增出条带，以后再也扩增不出来，我都要疯掉了。有没有做克隆的大哥大姐，帮我分析一下原因到底可能出在哪里呢？还有我的分子基础薄弱，关于克隆基因的一些好的建议希望大家不吝指教，拜谢了。
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1楼 2011-04-12 13:11:31
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 同意 2011-04-12 17:02:11
引用回帖:
Originally posted by 紫色云梦 at 2011-04-12 13:11:31:
最近被实验搞得头都大了，导师让做MHC基因克隆，现在还在中间目的片段的扩增阶段，设计了很多引物，中间只有偶尔一两次扩增出条带，以后再也扩增不出来，我都要疯掉了。有没有做克隆的大哥大姐，帮我分析一下原因 ...

你能把问题问的更详细点吗？
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-04-12 13:53:49
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475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-12 17:01:35
你先查文献看看那有没有相同引物的外文，可以引用一下，如果能扩出目的基因，再在此引物基础上家酶切位点就行了。保护碱基可以不加，根据你的引物GC含量而定
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2011-04-12 15:32:46
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
1949stone(EPI+1): 鼓励 2011-04-12 17:00:51
其实对于你这个MHC基因克隆我不太懂。。。
不过要克隆一个基因首先要知道这个基因的全序列，然后找个软件来设计引物（我们用英杰的NTI），设计引物我想你在板块里可以找到很多帖子是关于如何设计引物的，这里就不赘述了；设计好引物之后交由公司合成，回来直接PCR，就OK了！

不过PCR之前最好先根据引物合成报告单知道Tm值，P的时候设置一个温度梯度，看看哪个温度下P出来的条带最亮。然后就选用那个温度大批量进行扩增。。。。

不知道你清楚我说的嘛？

如果哪里不懂PM我！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-12 16:49:51
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meizishu

禁虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-12 17:01:45
本帖内容被屏蔽
5楼2011-04-12 16:56:59
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yj-lzx

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫生化熊

优秀版主
★
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你扩的是什么物种的啊~~~
稀有的么~~~
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曾经的你/以为只要带着那把青春的长剑和赤子的良心就可以说服自己不出卖理想的灵魂/在最寂寞和不得不流泪的晚上/即使连自己都在笑自己傻/依然拔出怀中的长剑~~~
6楼2011-04-13 09:58:50
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紫色云梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yj-lzx at 2011-04-13 09:58:50:
你扩的是什么物种的啊~~~
稀有的么~~~

普通的棘胸蛙，呵呵。
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7楼2011-04-13 13:26:18
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emilyding

金虫 (小有名气)
★
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是不是克隆片段太大了啊，或者可以选择低保真的Taq酶试试
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好好科研，好好生活！
8楼2011-04-13 13:39:37
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baiyidao

金虫 (小有名气)
SO EASY!
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9楼2011-04-13 13:44:09
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