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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法
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pipi8421

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法 已有18人参与

大家好，用CTAB法提取了dna，但是pcr没出结果，引物什么的都是筛选好的，帮我看看我的dna提取质量行不行？下面亮的一团用什么提取方法会尽可能的减少？谢谢各位！
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1楼 2010-11-19 09:58:12
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-19 13:34:23
RNASE
37度处理1h
研磨再充分点，或者材料再多些，或者少些水溶解。。。
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不孝有三，读博为大！
2楼2010-11-19 11:11:37
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★
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提DNA，不用RNASE吧~~~我觉得是不是可以再用酚仿抽提几次呢？
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3楼2010-11-19 11:33:19
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
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下面的应该是RNA，没去干净。DNA还行嘛。不晓得你点了多少浓度一般。
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4楼2010-11-19 11:53:45
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-11-19 16:08:06
你Marker用的DL2000？提gDNA用λ Hind III marker啦。
下面那一大团亮的就是RNA咯，要么用RNA酶消化一下，要么找个kit，过柱纯化一下。
看起来DNA提的还不错，PCR不行应该不是模板的问题。
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5楼2010-11-19 14:00:35
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ysy000000

木虫 (正式写手)
★
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如果你的材料比较多 可以抽提2次，如果材料少 别抽提或过柱，这样每次要损失至少60%的DNA
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劳其筋骨，饿其体肤。
6楼2010-11-20 21:10:27
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):高手啊 2010-11-21 00:33:03
那亮带应该是RNA.
确定酚是TRIS饱和的，而且碱度够（确定酚没过期）。酚氯仿多处理一次,时间延长点，RNA就处理掉了。
另外建议你提高点组织量，你的基因组亮度不高。当然，看你的目的，如果你不需要那么多量的话就不必了。
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7楼2010-11-20 23:44:11
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pipi8421

银虫 (初入文坛)

CTAB法提取了dna，帮我看看改进方法

谢谢给位，给我的指点，我提取植物叶片大约100mg，用了50ul的TE溶解的，点了3ul。下面的一团有没有可能是多糖多酚的污染，我的组织材料含有的多糖多酚比较多，我提取时没用苯酚，用氯仿异戊醇24:1提取的。marker是TAKARA的DL2000。
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8楼2010-11-24 14:41:40
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★
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那一坨很亮的东西是RNA。RNA与PCR的成功并没有关系，我做PCR有很多年了，从来不除去RNA的。从你的DNA来看，量是够的，可能有一些影响PCR的其他杂质，或者是你的引物设计得不合适。
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9楼2010-11-24 14:55:46
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pipi8421

银虫 (初入文坛)

CTAB法提取了dna，帮我看看改进方法

CTAB在4度下能放多长时间？我放了快两个月了，应该没问题吧？
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10楼2010-11-24 15:49:31
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