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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★
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扩不出来可能是，有机溶剂没有洗干净，可以将模板稀释5倍10倍100倍进行扩增
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11楼2010-11-24 18:23:00
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夜舞龙

至尊木虫 (知名作家)
★
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CTAB室温放很久都能用，我用过放一年多的。
100mg是用1.5ml管子提的吗？多少提取缓冲液？如果是多糖多酚的植物，我觉得是样品用的太多。这样的植物一定要敢于减少用的样品量，才会提出质量和浓度都很好的DNA，我做过的松树和几种灌木都证实这一点。

[ Last edited by 夜舞龙 on 2010-11-24 at 21:15 ]
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12楼2010-11-24 21:10:20
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tracy198410

金虫 (小有名气)
★
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没用饱和酚抽提的话蛋白质杂质应该多一些吧，一般需要抽提2-3次
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走过弯路不可怕，失败了也不可怕，可怕的是忘却了最初的梦想，放弃了最初的坚定
13楼2010-11-25 12:19:52
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clare420

新虫 (小有名气)
★
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不是多糖污染，多糖污染是锯齿状的，多酚污染可以看出来啊，有的有颜色的，可以试试PVP，或提取时用高盐溶液，还有就是有RNA 污染的原因很多，可能和材料，用量，酸碱度有关，你用的什么平衡的酚？
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14楼2010-11-25 16:34:39
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qidannvzi

银虫 (正式写手)
★
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西瓜: gDNA就是基因组DNA的意思。maker可以问问你们当地的代理商哦 2011-12-08 19:00:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by holyala at 2010-11-19 14:00:35:
你Marker用的DL2000？提gDNA用λ Hind III marker啦。
下面那一大团亮的就是RNA咯，要么用RNA酶消化一下，要么找个kit，过柱纯化一下。
看起来DNA提的还不错，PCR不行应该不是模板的问题。

我想问，那个gDNA是什么意思，是基因组DNA的意思么？λ Hind III marker这个又是什么呢？我找不到合适的检测DNA的marker。
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准备跨新年！
15楼2011-12-07 16:51:28
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peng~yu

银虫 (小有名气)
★ ★
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西瓜(金币+1): 用量是多少捏？嘿嘿 2011-12-08 19:00:28
下面的亮带肯定是RNA  不会是别的东西了~方法就是再用RNAase消化一段时间~我提基因组的话一般都是RNAase消化30-40分钟的呢~
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16楼2011-12-07 23:49:31
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elbo

金虫 (小有名气)
★
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我感觉你提的DNA量不多，我一般提的时候都不加RNA 酶，几乎没有RNA，说明提取过程还是有点问题。
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17楼2011-12-08 15:06:55
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
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西瓜(金币+2): Good！ 2011-12-08 19:00:47
下面的亮带就是RNA 我一般都是在用酚仿抽提之后，加RNase处理一小时，然后再用氯仿异戊醇抽提一次 这样提取的DNA里就没有RNA了，至于pcr 跟你的程序和引物都有很大关系的 λ Hind III 也是一种marker 一般基因组DNA我们用这个marker来比较 这种marker里有23kb的条带 和基因组差不多了 我们买的是天根的 你查查就能查出来了
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18楼2011-12-08 15:32:22
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wcg129

禁虫 (著名写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): Good！ 2011-12-08 19:00:57
本帖内容被屏蔽
19楼2011-12-08 16:03:43
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peng~yu

银虫 (小有名气)
★
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RNAase的话我的用量一般是3ul，太多的话是会降解DNA的。。
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20楼2011-12-09 20:35:17
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