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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急！ 帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图
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acnotlove

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急！ 帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图

紧急求救：急啊 ，。大侠们帮忙分析下我提取真姬菇的DNA的电泳图~~~~~

最后100KB的地方为什么会出现那么亮的条带，什么原因？那条带代表什么？

我的CTAB法提取步骤：
(1) 在7mL离心管中加入65℃预热的抽提液2.5mL。
(2) 加入1g样品液氮研磨，加入巯基乙醇50μL，上下震荡，使蛋白质变性沉淀， 65℃水浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。
(3) 加入等体积（约3mL）的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，除去蛋白质，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(4) 取上清（约2.5mL）到7mL管，加1/5体积（约0.5mL）65℃预热的CTAB/NaCl混匀，加入2mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(5) 取上清，加等体积（约3mL）的CTAB沉淀液，颠倒混匀。65℃水浴30min至沉淀可见。4℃平衡离心，10000 rpm，10min后小心去上清。
(6) 沉淀用TE（0.5mL）溶解，加入等体积（约0.5mL）的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(7) 取上清加入2倍体积的无水乙醇（1mL），再加入1/10体积的NaAC （pH 5.2）约0.1mL。
(8) -20℃冰箱1h，4℃平衡离心，12000rpm，10min，弃上清，用70%酒精清洗2次，滤纸吸去多余水分，超净台吹干。
(9) 0.05mL TE溶解，-20℃保存。

电泳图


最后100KB的地方为什么会出现那么亮的条带，什么原因？那条带代表什么？
蛋白质？RNA？还是什么~
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1楼 2010-11-03 22:06:48
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yanliruqun

新虫 (初入文坛)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-03 23:34:00
acnotlove(金币+1): 2010-11-05 00:00:48
是这样子的，最后的是污染的RNA
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2楼2010-11-03 23:25:22
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
acnotlove(金币+1): 2010-11-05 00:00:54
最后100KB的地方为什么会出现那么亮的条带?
应该是100bp处吧？应该是RNA，你的gDNA量很低啊，不过做PCR还可以。
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-04 09:45:27
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
acnotlove(金币+1): 2010-11-05 00:01:01
楼上正解~
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4楼2010-11-04 10:24:36
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
acnotlove(金币+1): 2010-11-05 00:00:34
基因组DNA的提取量比较低。

RNA污染比较严重，可以用RNase简单处理一下或者吐点唾沫处理一下，嘿嘿，管用滴。

仔细斟酌一下步骤，上网多找找别人做的，比较一下，摸索一下条件。样品起始量切勿过量。

凝胶制备的还可以，可以做0.8%的琼脂糖凝胶。上样前可预处理RNA污染。注意跑胶条件，先低压出孔后调整。

新手已经不错了！鼓励！
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5楼2010-11-04 10:54:51
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