应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！
81/1返回列表
查看: 1686  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

11wl11

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！

师兄出国了，留下来构建的工程菌（4种），IPTG诱导表达带his标签的目的蛋白，主要是包涵体表达，我Ni柱纯化，发现没有结果，就用his的单抗做了个western blot，结果如下：

在附上一个考马斯亮蓝的结果：

这里的“上清”和“沉淀”是超声破碎的上清和沉淀。

[ Last edited by 11wl11 on 2010-11-13 at 11:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-11 18:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11wl11

新虫 (初入文坛)
补充说一下，我之后还用没有诱导和空载体质粒菌株做了western blot，结果都是没有检测到有his阳性的蛋白条带。
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-11 19:49:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11wl11

新虫 (初入文坛)
不能沉了~顶起来！
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-12 09:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11wl11

新虫 (初入文坛)
要说的有没有可能是降解了，所以才有这么多片段；
还有没有这种可能，稀有密码子的影响，因为目的DNA序列中确实存在稀有密码子。
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-12 17:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11wl11

新虫 (初入文坛)
如果是降解，为什么上清中没有降解，沉淀（包涵体）部分降解了？
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-13 11:46:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
11wl11(金币+1): 2010-11-13 19:16:52
不懂分子 帮你顶一下
回复此楼
6楼2010-11-13 17:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11wl11

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-11-13 17:04:20:
不懂分子 帮你顶一下

十分感谢！！！
回复此楼
7楼2010-11-13 21:30:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水5886

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
表达结果很好呀，只是包涵体表达，用Ni柱纯化时要先加尿素等让包涵体变性，这样才能把his标签暴露出来和Ni柱结合哦
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-17 17:03:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 11wl11 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭