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11wl11

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】急!急!急! his标签表达的蛋白出问题了,求指导!!!

师兄出国了,留下来构建的工程菌(4种),IPTG诱导表达带his标签的目的蛋白,主要是包涵体表达,我Ni柱纯化,发现没有结果,就用his的单抗做了个western blot,结果如下:

在附上一个考马斯亮蓝的结果:

这里的“上清”和“沉淀”是超声破碎的上清和沉淀。

[ Last edited by 11wl11 on 2010-11-13 at 11:42 ]
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11wl11

新虫 (初入文坛)


补充说一下,我之后还用没有诱导和空载体质粒菌株做了western blot,结果都是没有检测到有his阳性的蛋白条带。
2楼2010-11-11 19:49:54
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11wl11

新虫 (初入文坛)


不能沉了~顶起来!
3楼2010-11-12 09:24:31
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11wl11

新虫 (初入文坛)


要说的有没有可能是降解了,所以才有这么多片段;
还有没有这种可能,稀有密码子的影响,因为目的DNA序列中确实存在稀有密码子。
4楼2010-11-12 17:59:39
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11wl11

新虫 (初入文坛)


如果是降解,为什么上清中没有降解,沉淀(包涵体)部分降解了?
5楼2010-11-13 11:46:07
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看天

木虫 (知名作家)


11wl11(金币+1): 2010-11-13 19:16:52
不懂分子 帮你顶一下
6楼2010-11-13 17:04:20
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11wl11

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-11-13 17:04:20:
不懂分子 帮你顶一下

十分感谢!!!
7楼2010-11-13 21:30:01
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若水5886

新虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
表达结果很好呀,只是包涵体表达,用Ni柱纯化时要先加尿素等让包涵体变性,这样才能把his标签暴露出来和Ni柱结合哦
8楼2012-02-17 17:03:05
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