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【求助/交流】谁知道如何去除GST标签啊,帮帮忙啊,急!
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chunmeiyang
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专业: 肿瘤化学药物治疗
[交流]
【求助/交流】谁知道如何去除GST标签啊,帮帮忙啊,急!
已有4人参与
我在做碳酐酶9的表达纯化,纯化出来后不知道如何切掉GST标签,试过用凝血酶切割,但切完蛋白都到沉淀里了,而且有很多没有切开,不知道该怎么办了。
想请问各位,碳酐酶9的分子量是30KD,GST的分子量是26KD,GST如果不切除,对碳酐酶的活性会不会有影响啊?如果切除,应该用什么方法啊?能否具体说一下,不甚感激!
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【求助/交流】带GST标签的重组蛋白的纯化?
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2010-05-07 11:15:41
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lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-05-08 12:22:26
这么大的标签肯定对活性有影响啊。
你切的时候估计缓冲体系有点问题吧,要么浓度太低。你可以试着把蛋白挂到GST柱上,在柱上切割。要么你就用非融合表达吧,也很简单啊。
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VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼
2010-05-08 11:33:02
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1949stone(金币+1):谢谢分享 2010-05-08 12:51:10
不太懂这个,觉得有没有活性可以表达并纯化后做一下检测,至于怎么切除,是不是在构建载体的时候应该在GSt与目的基因之间加上蛋白酶切位点肠激酶什么的。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
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2010-05-08 12:01:38
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小木虫(金币
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标签也不一定对活性有影响,要具体做活性测试之后才知道
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4楼
2010-05-08 14:40:10
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