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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】谁知道如何去除GST标签啊，帮帮忙啊，急！
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】谁知道如何去除GST标签啊，帮帮忙啊，急！ 已有4人参与

我在做碳酐酶9的表达纯化，纯化出来后不知道如何切掉GST标签，试过用凝血酶切割，但切完蛋白都到沉淀里了，而且有很多没有切开，不知道该怎么办了。
      想请问各位，碳酐酶9的分子量是30KD，GST的分子量是26KD，GST如果不切除，对碳酐酶的活性会不会有影响啊？如果切除，应该用什么方法啊？能否具体说一下，不甚感激！
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1楼 2010-05-07 11:15:41
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-05-08 12:22:26
这么大的标签肯定对活性有影响啊。
你切的时候估计缓冲体系有点问题吧，要么浓度太低。你可以试着把蛋白挂到GST柱上，在柱上切割。要么你就用非融合表达吧，也很简单啊。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2010-05-08 11:33:02
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢分享 2010-05-08 12:51:10
不太懂这个，觉得有没有活性可以表达并纯化后做一下检测，至于怎么切除，是不是在构建载体的时候应该在GSt与目的基因之间加上蛋白酶切位点肠激酶什么的。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-05-08 12:01:38
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keeperw

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
标签也不一定对活性有影响，要具体做活性测试之后才知道
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4楼2010-05-08 14:40:10
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逆天寻梦

新虫 (初入文坛)
请问解决了吗？
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5楼2018-09-04 23:47:04
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