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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了
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wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了已有22人参与

最近做AFLP大板 胶用的6%的 总是在梳子的位置凝的不好 6%的工作液是新配的，一般凝固两个小时 求指点啊 是APS的问题？这个有使用期限吗
我的配方如下：
丙烯酰胺       15g
甲叉丙烯酰胺   0.75g
尿素           114g
5xTBE                 50ml
双蒸水          100ml
定容至250ml
每次配胶 每36ml的工作液里，加36微升的TEMED和180微升的10%的APS，
不知道大家都加多少TEMED呢？加大点儿量会不会好凝一点
最近一直困扰 求指点了 谢谢了 不胜感激啊
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1楼2012-02-29 21:13:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
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APS我一般是一次配好，分装多管，-20度保存，一管用一两周没问题。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2012-03-01 00:11:41
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普通回帖

ixido

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 很详细哦 2012-03-01 09:56:09
TEMED加大量会加速凝，但是凝的速度过快胶会不匀，影响跑胶的质量。APS一般是现用现配，如果一次配的很多的话，要4度存放，但是也不要超过一个星期。这种东西也不贵，现配最好。
胶不凝的问题，你先试试把梳子洗干净，吹干，再用。梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。
如果梳子没有问题，那么你在倒胶之前要好好的混匀，剧烈一点都没有关系，一定一定要混匀。
最后还是不行的话，那你需要考虑一下其他试剂的问题了。
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2楼2012-02-29 22:58:01
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)
★
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小丹木木(金币+1): 鼓励交流 2012-03-01 09:56:28
个人习惯：
加大temed和过硫酸铵的用量，使凝胶在半个小时左右凝结最好，
我现在这两样的使用量已经是教科书的两倍，在夏季会加到1.5倍左右
过硫酸铵从来都是现配，从不用过夜的，不管怎么保存；
配个0.5ml-1ml，随便称点，配个浓度，最后以加入量调整

[ Last edited by lzgxgz on 2012-3-1 at 07:33 ]
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4楼2012-03-01 07:30:21
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307951232

金虫 (初入文坛)
★
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你加的TMD和APS都没神马问题，有可能板和梭子没洗干净
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5楼2012-03-01 08:54:56
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xiaohaiyu

金虫 (正式写手)
★
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TEMED的 量和APS的量要协调好，最好同时加，放在温度稍高的地方凝固，我有时候配好后混匀，微波炉加热5秒钟，再混混，开始灌胶的。
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6楼2012-03-01 09:04:21
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liugs

禁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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7楼2012-03-01 09:11:13
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yunbfly

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
AP固体是需要放在冰箱储存的，否则在室温放半年到一年就可能会失效。还有丙烯酰胺有质量问题也会不怎么凝，而且严重影响电泳质量
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8楼2012-03-01 09:22:15
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若水5886

新虫 (小有名气)
★
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不知道你的意思是不是梳子那地方的梳齿比较低了，能上样的体积比较小，如果是这样的话建议你稍微多加一点TEMED，加胶之前最好是充分摇匀并尽量避免跟空气接触太长时间哦
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9楼2012-03-01 09:47:11
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cgspider

木虫 (正式写手)
★
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O(∩_∩)O哈哈~，我以前做DGGE碰到的问题

凝的时间太长是因为温度太低了，不容易凝，解决方法：
1. 加大APS和TEMED的量；
2. 用吹风机的热风稍远的距离吹，但是不要只对着一个地方吹，到时候胶可能不均匀；

[ Last edited by cgspider on 2012-3-1 at 10:31 ]
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你的能力撑不起你的野心
10楼2012-03-01 10:28:40
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