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wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了已有22人参与

最近做AFLP大板 胶用的6%的 总是在梳子的位置凝的不好 6%的工作液是新配的,一般凝固两个小时 求指点啊 是APS的问题?这个有使用期限吗
我的配方如下:
丙烯酰胺       15g
甲叉丙烯酰胺   0.75g
尿素           114g
5xTBE                 50ml
双蒸水          100ml
定容至250ml
每次配胶 每36ml的工作液里,加36微升的TEMED和180微升的10%的APS,
不知道大家都加多少TEMED呢?加大点儿量会不会好凝一点
最近一直困扰 求指点了 谢谢了 不胜感激啊
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cgspider

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
O(∩_∩)O哈哈~,我以前做DGGE碰到的问题

凝的时间太长是因为温度太低了,不容易凝,解决方法:
1. 加大APS和TEMED的量;
2. 用吹风机的热风稍远的距离吹,但是不要只对着一个地方吹,到时候胶可能不均匀;

[ Last edited by cgspider on 2012-3-1 at 10:31 ]
你的能力撑不起你的野心
10楼2012-03-01 10:28:40
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cgspider

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by wskxbxf at 2012-03-01 13:36:12:
谢谢您的回复 追问一下 您一般加的APS和TEMED的量是多少呢 我把握不好加大的尺度 给个参考吧 谢谢了

上层胶吧?5ml体系,APS加了60ul,TEMED加了15ul, ,夏天的时候是分别加40 和8 ul
你的能力撑不起你的野心
22楼2012-03-01 14:15:13
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