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jyongchao木虫 (正式写手)
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"6% polyacrylamide sequencing gel"是指什么样的聚丙烯酰胺凝胶？
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| 如题，"6% polyacrylamide sequencing gel"是指什么样的聚丙烯酰胺凝胶？与一般的聚丙烯酰胺凝胶凝胶有什么不同吗？ |
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gwbk
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
jyongchao(金币+2): 优秀 2011-07-22 09:27:36
西瓜(金币+5): Good！ 2011-07-22 12:18:47
jyongchao(金币+2): 优秀 2011-07-22 09:27:36
西瓜(金币+5): Good！ 2011-07-22 12:18:47
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6%聚丙烯酰胺测序胶，现在都没人配制这种胶了吧？ 1，蛋白质6%变性PAGE，配制中加入pH6.8的Tris，加了10%的SDS，电泳缓冲液Tris-gly-SDS。 2，非变性PAGE（Native-PAGE），跑DNA。电泳缓冲液TAE、TBE。 3，测序胶：在2的基础上加入7mol/L的尿素。 4，上样缓冲液也有所不同。 5，过硫酸铵和TEMED在DNA凝胶中浓度不随聚丙烯酰胺浓度变化而变化。 |
2楼2011-07-22 02:01:20
gaoyang636
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5楼2011-07-22 12:23:18
西瓜
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6楼2011-07-22 17:07:06
jyongchao
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7楼2011-07-22 18:12:29
gwbk
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以下资料供你参考： 1，加样缓冲液： 98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚蓝 也有人用6*Loading Buffer的，可能会沉不下去，可以用注射器加样。 2，超声清洗超声加玻璃棒搅拌，或者放微波炉里稍微加热一下，尿素的溶解性很好的。实在有沉底，只能说明尿素不好使，可以用滤纸过滤。如果不放心可以用0.22um的过滤膜过滤。 3，非变性聚丙烯酰胺凝胶用于分离和纯化双链DNA片段，变性聚丙烯酰胺凝胶用于分离和纯化单链DNA片段。DNA上样前需要95℃变性2-5min。 4，变性胶电泳时需要高电压、低电流、恒功率以保证条带的分离。如果测序仪电泳的话，1500V~2000V（胶比较长），普通电泳100~200V，也可以放4℃，电压调高一点。有资料恒定功率85W的。 |
8楼2011-07-22 22:34:34
jyongchao
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