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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了
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ww1980666

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
TEMED和APS加大量，多加点没有关系，反正要预电泳的。还有实验室最好开起空调，温度高要凝的快点。本人一直在做大板胶，没有问题。
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11楼2012-03-01 12:01:28
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by ixido at 2012-02-29 22:58:01:
TEMED加大量会加速凝，但是凝的速度过快胶会不匀，影响跑胶的质量。APS一般是现用现配，如果一次配的很多的话，要4度存放，但是也不要超过一个星期。这种东西也不贵，现配最好。
胶不凝的问题，你先试试把梳子洗 ...

谢谢您的指点 还有个问题追问一下 如果混匀的时候 剧烈的话 岂不会产生气泡吗 倒较的时候 不会有影响吗 我一般都拿在手掌上 拿着瓶子左右打圈 混得不是很剧烈 也可能是这个原因吧
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12楼2012-03-01 13:32:06
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-01 00:11:41:
APS我一般是一次配好，分装多管，-20度保存，一管用一两周没问题。

哦 谢谢了 可能我的APS时间长了 我这次重新配一下
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13楼2012-03-01 13:32:38
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-01 07:30:21:
个人习惯：
加大temed和过硫酸铵的用量，使凝胶在半个小时左右凝结最好，
我现在这两样的使用量已经是教科书的两倍，在夏季会加到1.5倍左右
过硫酸铵从来都是现配，从不用过夜的，不管怎么保存；
配个0.5ml-1 ...

非常感谢 呵呵
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14楼2012-03-01 13:32:55
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 307951232 at 2012-03-01 08:54:56:
你加的TMD和APS都没神马问题，有可能板和梭子没洗干净

恩 也有可能下次注意一下
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15楼2012-03-01 13:33:19
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by xiaohaiyu at 2012-03-01 09:04:21:
TEMED的 量和APS的量要协调好，最好同时加，放在温度稍高的地方凝固，我有时候配好后混匀，微波炉加热5秒钟，再混混，开始灌胶的。

恩 谢谢了
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16楼2012-03-01 13:33:49
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by yunbfly at 2012-03-01 09:22:15:
AP固体是需要放在冰箱储存的，否则在室温放半年到一年就可能会失效。还有丙烯酰胺有质量问题也会不怎么凝，而且严重影响电泳质量

丙烯酰胺应该没什么问题 买的都是比较好的 可能是我的APS的问题 谢谢了 呵呵
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17楼2012-03-01 13:34:39
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-03-01 09:47:11:
不知道你的意思是不是梳子那地方的梳齿比较低了，能上样的体积比较小，如果是这样的话建议你稍微多加一点TEMED，加胶之前最好是充分摇匀并尽量避免跟空气接触太长时间哦

恩 最近也考虑这样做 谢谢了
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18楼2012-03-01 13:35:10
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by cgspider at 2012-03-01 10:28:40:
O(∩_∩)O哈哈~，我以前做DGGE碰到的问题

凝的时间太长是因为温度太低了，不容易凝，解决方法：
1. 加大APS和TEMED的量；
2. 用吹风机的热风稍远的距离吹，但是不要只对着一个地方吹，到时候胶可能不均匀；

谢谢您的回复 追问一下 您一般加的APS和TEMED的量是多少呢 我把握不好加大的尺度 给个参考吧 谢谢了
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19楼2012-03-01 13:36:12
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by ww1980666 at 2012-03-01 12:01:28:
TEMED和APS加大量，多加点没有关系，反正要预电泳的。还有实验室最好开起空调，温度高要凝的快点。本人一直在做大板胶，没有问题。

恩 谢谢了 想知道一下您一般加的量是多少 什么比例大概 我有的时候会晚上倒胶 第二天早晨跑板 不知道您这样做过没 谢谢指导
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20楼2012-03-01 13:37:41
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