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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了
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若水5886

新虫 (小有名气)
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20楼: Originally posted by wskxbxf at 2012-03-01 13:37:41:
恩 谢谢了 想知道一下您一般加的量是多少 什么比例大概 我有的时候会晚上倒胶 第二天早晨跑板 不知道您这样做过没 谢谢指导

如果是第二天跑板的话建议把胶连板一起放入跑胶缓冲液里，4度存放。TEMED的话10 ml的配胶体系可以加3-5ul原液，不过要立即混匀以防局部凝固，APS配好4度一周内用，可以加个15-30 ul 。冬天天冷，胶凝的慢，不要急于求成放高温环境了。
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21楼2012-03-01 14:12:20
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cgspider

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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19楼: Originally posted by wskxbxf at 2012-03-01 13:36:12:
谢谢您的回复 追问一下 您一般加的APS和TEMED的量是多少呢 我把握不好加大的尺度 给个参考吧 谢谢了

上层胶吧？5ml体系，APS加了60ul，TEMED加了15ul， ，夏天的时候是分别加40 和8 ul
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你的能力撑不起你的野心
22楼2012-03-01 14:15:13
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装子516

铁虫 (初入文坛)
★
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ap和temed还是不要加多了，会影响胶，催化过快导致胶太脆，可能是梳子没擦干净，不知道跟室温关系大不大！我们当初在实验室做这个的时候都是前天晚上做好，第二天上午来直接用的！
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23楼2012-03-01 15:45:26
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 装子516 at 2012-03-01 15:45:26:
ap和temed还是不要加多了，会影响胶，催化过快导致胶太脆，可能是梳子没擦干净，不知道跟室温关系大不大！我们当初在实验室做这个的时候都是前天晚上做好，第二天上午来直接用的！

哦 其实之前做的 也都是晚上倒的凝的相对好 请问您晚上倒好之后 就在室温里放着是吧？没有什么特殊的处理吧
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24楼2012-03-01 16:11:37
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装子516

铁虫 (初入文坛)
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24楼: Originally posted by wskxbxf at 2012-03-01 16:11:37:
哦 其实之前做的 也都是晚上倒的凝的相对好 请问您晚上倒好之后 就在室温里放着是吧？没有什么特殊的处理吧

没有特殊处理，第二天直接用就行，梳子也很好拔！
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25楼2012-03-01 16:31:59
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zhangyiz

禁虫 (正式写手)
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小丹木木(金币+2): 鼓励交流 2012-03-01 17:13:59
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wskxbxf
26楼2012-03-01 17:08:48
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九庄湖

铜虫 (小有名气)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我也遇到过这样的问题，多加了些AP就好了。我看分子克隆上是每次用都要现配现用
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“下一件事不会太难，去快乐的做吧！”
27楼2012-03-01 17:08:49
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ixido

木虫 (小有名气)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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12楼: Originally posted by wskxbxf at 2012-03-01 13:32:06:
谢谢您的指点 还有个问题追问一下 如果混匀的时候 剧烈的话 岂不会产生气泡吗 倒较的时候 不会有影响吗 我一般都拿在手掌上 拿着瓶子左右打圈 混得不是很剧烈 也可能是这个原因吧

就用枪头或者玻璃棒混匀，然后用枪或者吸管把没有泡的部分吸出来加到板子里。要不就直接倒，一般直接倒的话不会把泡倒进去的。
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28楼2012-03-01 17:25:21
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zhangsiju

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
放到烘箱里面，40-50℃，我就是这样解决的，纠结了好长时间。
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有梦想你就得去捍卫它
29楼2012-03-02 12:33:11
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cashfox

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
过夜的话，有没有用被电泳液（新配）浸湿的纱布覆盖？
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永远的伪知识分子——小小小色狼
30楼2012-03-02 13:50:18
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