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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了
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wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了 已有22人参与

最近做AFLP大板 胶用的6%的 总是在梳子的位置凝的不好 6%的工作液是新配的，一般凝固两个小时 求指点啊 是APS的问题？这个有使用期限吗
我的配方如下：
丙烯酰胺       15g
甲叉丙烯酰胺   0.75g
尿素           114g
5xTBE                 50ml
双蒸水          100ml
定容至250ml
每次配胶 每36ml的工作液里，加36微升的TEMED和180微升的10%的APS，
不知道大家都加多少TEMED呢？加大点儿量会不会好凝一点
最近一直困扰 求指点了 谢谢了 不胜感激啊
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1楼 2012-02-29 21:13:11
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若水5886

新虫 (小有名气)
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不知道你的意思是不是梳子那地方的梳齿比较低了，能上样的体积比较小，如果是这样的话建议你稍微多加一点TEMED，加胶之前最好是充分摇匀并尽量避免跟空气接触太长时间哦
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9楼2012-03-01 09:47:11
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若水5886

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
20楼: Originally posted by wskxbxf at 2012-03-01 13:37:41:
恩 谢谢了 想知道一下您一般加的量是多少 什么比例大概 我有的时候会晚上倒胶 第二天早晨跑板 不知道您这样做过没 谢谢指导

如果是第二天跑板的话建议把胶连板一起放入跑胶缓冲液里，4度存放。TEMED的话10 ml的配胶体系可以加3-5ul原液，不过要立即混匀以防局部凝固，APS配好4度一周内用，可以加个15-30 ul 。冬天天冷，胶凝的慢，不要急于求成放高温环境了。
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21楼2012-03-01 14:12:20
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