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新虫 (小有名气)

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[交流] 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好求指点急啊谢谢了已有22人参与

最近做AFLP大板胶用的6%的总是在梳子的位置凝的不好 6%的工作液是新配的，一般凝固两个小时求指点啊是APS的问题？这个有使用期限吗
我的配方如下：
丙烯酰胺    15g
甲叉丙烯酰胺 0.75g
尿素          114g
5xTBE                50ml
双蒸水       100ml
定容至250ml
每次配胶每36ml的工作液里，加36微升的TEMED和180微升的10%的APS，
不知道大家都加多少TEMED呢？加大点儿量会不会好凝一点
最近一直困扰求指点了谢谢了不胜感激啊

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1楼2012-02-29 21:13:11

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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 鼓励交流 2012-03-01 09:56:28

个人习惯：
加大temed和过硫酸铵的用量，使凝胶在半个小时左右凝结最好，
我现在这两样的使用量已经是教科书的两倍，在夏季会加到1.5倍左右
过硫酸铵从来都是现配，从不用过夜的，不管怎么保存；
配个0.5ml-1ml，随便称点，配个浓度，最后以加入量调整

[ Last edited by lzgxgz on 2012-3-1 at 07:33 ]

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4楼2012-03-01 07:30:21

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ixido

木虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 很详细哦 2012-03-01 09:56:09

TEMED加大量会加速凝，但是凝的速度过快胶会不匀，影响跑胶的质量。APS一般是现用现配，如果一次配的很多的话，要4度存放，但是也不要超过一个星期。这种东西也不贵，现配最好。
胶不凝的问题，你先试试把梳子洗干净，吹干，再用。梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。
如果梳子没有问题，那么你在倒胶之前要好好的混匀，剧烈一点都没有关系，一定一定要混匀。
最后还是不行的话，那你需要考虑一下其他试剂的问题了。

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2楼2012-02-29 22:58:01

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