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wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了 已有22人参与

最近做AFLP大板 胶用的6%的 总是在梳子的位置凝的不好 6%的工作液是新配的,一般凝固两个小时 求指点啊 是APS的问题?这个有使用期限吗
我的配方如下:
丙烯酰胺       15g
甲叉丙烯酰胺   0.75g
尿素           114g
5xTBE                 50ml
双蒸水          100ml
定容至250ml
每次配胶 每36ml的工作液里,加36微升的TEMED和180微升的10%的APS,
不知道大家都加多少TEMED呢?加大点儿量会不会好凝一点
最近一直困扰 求指点了 谢谢了 不胜感激啊
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
APS我一般是一次配好,分装多管,-20度保存,一管用一两周没问题。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-03-01 00:11:41
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ixido

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 很详细哦 2012-03-01 09:56:09
TEMED加大量会加速凝,但是凝的速度过快胶会不匀,影响跑胶的质量。APS一般是现用现配,如果一次配的很多的话,要4度存放,但是也不要超过一个星期。这种东西也不贵,现配最好。
胶不凝的问题,你先试试把梳子洗干净,吹干,再用。梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。
如果梳子没有问题,那么你在倒胶之前要好好的混匀,剧烈一点都没有关系,一定一定要混匀。
最后还是不行的话,那你需要考虑一下其他试剂的问题了。
2楼2012-02-29 22:58:01
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 鼓励交流 2012-03-01 09:56:28
个人习惯:
加大temed和过硫酸铵的用量,使凝胶在半个小时左右凝结最好,
我现在这两样的使用量已经是教科书的两倍,在夏季会加到1.5倍左右
过硫酸铵从来都是现配,从不用过夜的,不管怎么保存;
配个0.5ml-1ml,随便称点,配个浓度,最后以加入量调整

[ Last edited by lzgxgz on 2012-3-1 at 07:33 ]
4楼2012-03-01 07:30:21
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307951232

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你加的TMD和APS都没神马问题,有可能板和梭子没洗干净
5楼2012-03-01 08:54:56
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