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shenxing325铜虫 (小有名气)
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急！蛋白截短表达不成功~
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情况是这样的：我本来要表达一个蛋白，但是由于比较大，不容易表达（也是没做出来 ），因此我就选N末端（疏水性）进行表达。因为这一段前面还有信号肽，因此把这一段截出来的话我就人为在前面加上ATG以及在后面加上TGA。现在经过测序已经正确的连接到表达载体上了，但是还是没有表达（用SDS-PAGE作为检测手段），各位有做过蛋白截短表达嘛？请帮忙找一下原因，谢谢！！也做了比较久了，各位帮帮忙~~ |
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sl35537417
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2楼2011-11-13 20:31:54
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7楼2011-11-18 10:23:30
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【答案】应助回帖
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wanhscn(金币+2): Good！鼓励应助！ 2011-11-18 19:27:27
shenxing325(金币+20): 因为我实验室里只有我一个人做这个方面更，其他人都不相关，所以自己摸索得还不够，可以和你继续交流吗？你提供的信息对我很重要，谢谢！ 2011-11-19 10:38:05
wanhscn(金币+2): Good！鼓励应助！ 2011-11-18 19:27:27
shenxing325(金币+20): 因为我实验室里只有我一个人做这个方面更，其他人都不相关，所以自己摸索得还不够，可以和你继续交流吗？你提供的信息对我很重要，谢谢！ 2011-11-19 10:38:05
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我看楼主的专业像是做蛋白结构的，我和你也算是同行。我们实验室做截短表达从来都不是像你这样只做一个。 有些蛋白很难获得可溶性表达，所以通常采用的就是truncation。对于一些我们真正感兴趣的蛋白，为了筛到可溶性表达，我们都是几个氨基酸残基这样一步一步截短，做不同的N,C端截短组合，几百个克隆这样做。我还没听说过楼主这样的截短策略——盯住一个。 另外，在做截短之前需要对自己的蛋白二级结构做很多判断，比如存不存在disorder，哪些domain是真正重要的等等。 最后祝你试验顺利。 |
8楼2011-11-18 12:49:13
9楼2011-11-18 18:44:53
50