应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达系统不表达目的蛋白
91/1返回列表
查看: 2670  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] 原核表达系统不表达目的蛋白

将含有目的片段的质粒转入BL21，诱导表达后发现没有目的蛋白，这是为什么？
1酶切实验证明质粒中有目的片段
2测序表明没有移码突变，序列没有问题，没有提前终止
谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢
1楼 2011-10-14 09:33:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): Good！热心！专业！ 2011-10-14 18:01:03
rainontime(金币+1): 2011-10-17 09:06:12
rainontime(金币+1): 2011-10-17 09:07:13
原因有二：
1、诱导条件。蛋白的表达要考虑诱导时间、温度、IPTG浓度等，任何一个都会造成不表达或之所以检测不到，可能是诱导的蛋白已经降解。
2、载体问题。并非每个蛋白都适合在E. coli BL21中表达，需要尝试，找到最佳表达载体。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-10-14 13:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-10-14 18:01:25
rainontime(金币+1): 2011-10-17 09:06:22
对楼上的答案很赞，补充一些：
1、首先确认一下该载体在E.coli里边是否能表达，避免无谓的尝试和浪费，可以询问实验室前辈或者网上查询求助；
2、载体没问题的前提下，一般诱导条件设置： TPTG终浓度为1mM/ml（如果有诱导后死菌情况可以适当降低浓度）；诱导温度37、28、16诱导的都有，一般想要得到溶合蛋白是要低温诱导的；相应的诱导时间 37度（6-8h）、28度（过夜诱导）、16度（过夜诱导），自己尝试着摸最佳条件
赞一下(1人) 回复此楼
生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
3楼2011-10-14 14:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

li1977li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-14 18:01:31
还可以换表达宿主菌Rosetta试试，我们实验室用它来表达至今还未失过手。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-10-14 15:09:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-16 10:50:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-10-14 14:44:39:
对楼上的答案很赞，补充一些：
1、首先确认一下该载体在E.coli里边是否能表达，避免无谓的尝试和浪费，可以询问实验室前辈或者网上查询求助；
2、载体没问题的前提下，一般诱导条件设置： TPTG终浓度为1mM/ml（ ...

这个诱导的时间很重要的，曾在BL21中诱导花器官发育蛋白37℃半小时即可表达，2小时后降解完全。
建议按照正交实验设计相应的参数。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-10-16 08:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼上提及的都要考虑，此外还有稀有密码子的问题要考虑；
赞一下 回复此楼
致良知
6楼2011-10-16 09:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流！ 2011-12-11 17:53:21
同意1楼和2楼的说法，不知道你的诱导条件和温度、PH有关没，但一般用IPTG诱导的都和其浓度有关，另外诱导时间也很关键，诱导晚了有的就不表达了。
赞一下(1人) 回复此楼
dasheng1980
7楼2011-12-11 08:57:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

果断悉尼

铁杆木虫 (知名作家)

三沙市名誉常务副市长

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
rainontime(金币+2): 2012-01-17 14:04:20
撇开诸位所讲的 会不会是你的蛋白太小 跑胶看不到 ；
WB检测下是否表达
赞一下 回复此楼
我的微信号happyjk5208，谢绝闲聊
8楼2011-12-13 10:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水5886

新虫 (小有名气)
1. 看你的目的蛋白是不是毒性蛋白，如果是毒性的需要在特殊的表达宿主里表达。
2. 诱导的条件要优化。
3. 诱导表达的蛋白是可溶性的还是以包涵体形式存在的？如果是包涵体形式表达或者是表达条件不合适使蛋白以包涵体形式存在的话，要检测菌沉淀而不是上清
赞一下 回复此楼
9楼2012-02-17 17:26:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rainontime 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +7 慕寒mio 2026-03-16 7/350 2026-03-19 10:57 by w沐阳w
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭