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rainontime新虫 (小有名气)
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[求助]
原核表达系统不表达目的蛋白
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将含有目的片段的质粒转入BL21，诱导表达后发现没有目的蛋白，这是为什么？ 1酶切实验证明质粒中有目的片段 2测序表明没有移码突变，序列没有问题，没有提前终止 谢谢！ |
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 蛋白表达纯化与检测 |
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4楼2011-10-14 15:09:57
poog502
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2楼2011-10-14 13:50:50
xbl3688
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-10-14 18:01:25
rainontime(金币+1): 2011-10-17 09:06:22
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-10-14 18:01:25
rainontime(金币+1): 2011-10-17 09:06:22
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对楼上的答案很赞，补充一些： 1、首先确认一下该载体在E.coli里边是否能表达，避免无谓的尝试和浪费，可以询问实验室前辈或者网上查询求助； 2、载体没问题的前提下，一般诱导条件设置： TPTG终浓度为1mM/ml（如果有诱导后死菌情况可以适当降低浓度）；诱导温度37、28、16诱导的都有，一般想要得到溶合蛋白是要低温诱导的；相应的诱导时间 37度（6-8h）、28度（过夜诱导）、16度（过夜诱导），自己尝试着摸最佳条件 |
3楼2011-10-14 14:44:39
poog502
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5楼2011-10-16 08:49:16