| 查看: 5322 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
shenxing325铜虫 (小有名气)
|
[求助]
急！蛋白截短表达不成功~
|
||
情况是这样的：我本来要表达一个蛋白，但是由于比较大，不容易表达（也是没做出来 ），因此我就选N末端（疏水性）进行表达。因为这一段前面还有信号肽，因此把这一段截出来的话我就人为在前面加上ATG以及在后面加上TGA。现在经过测序已经正确的连接到表达载体上了，但是还是没有表达（用SDS-PAGE作为检测手段），各位有做过蛋白截短表达嘛？请帮忙找一下原因，谢谢！！也做了比较久了，各位帮帮忙~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有113人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 目的蛋白序列连接pet15b测序结果正确为何不表达
已经有7人回复
- 蛋白表达不明确，但是连菌体蛋白都不见
已经有9人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 原核表达系统不表达目的蛋白
已经有8人回复
- 蛋白表达量少 怎么办
已经有11人回复
- 【求助/交流】原核表达 诱导时间的长短影不影响蛋白的活性啊？
已经有6人回复
- 【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！
已经有7人回复
- 【求助/交流】我真晕~~~做培养基蛋白胨少加了一位小数点的~~大家说能长出菌吗~~
已经有24人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
- 【求助/交流】血清中蛋白质多少转离心才能使其沉淀?
已经有8人回复
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
我爱打老虎
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113392
- 散金: 1526
- 红花: 224
- 沙发: 1
- 帖子: 28967
- 在线: 3730.3小时
- 虫号: 464575
- 注册: 2007-11-21
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
【答案】应助回帖
★ ★
wanhscn(金币+2): Good！鼓励应助！ 2011-11-18 19:27:27
shenxing325(金币+20): 因为我实验室里只有我一个人做这个方面更，其他人都不相关，所以自己摸索得还不够，可以和你继续交流吗？你提供的信息对我很重要，谢谢！ 2011-11-19 10:38:05
wanhscn(金币+2): Good！鼓励应助！ 2011-11-18 19:27:27
shenxing325(金币+20): 因为我实验室里只有我一个人做这个方面更，其他人都不相关，所以自己摸索得还不够，可以和你继续交流吗？你提供的信息对我很重要，谢谢！ 2011-11-19 10:38:05
|
我看楼主的专业像是做蛋白结构的，我和你也算是同行。我们实验室做截短表达从来都不是像你这样只做一个。 有些蛋白很难获得可溶性表达，所以通常采用的就是truncation。对于一些我们真正感兴趣的蛋白，为了筛到可溶性表达，我们都是几个氨基酸残基这样一步一步截短，做不同的N,C端截短组合，几百个克隆这样做。我还没听说过楼主这样的截短策略——盯住一个。 另外，在做截短之前需要对自己的蛋白二级结构做很多判断，比如存不存在disorder，哪些domain是真正重要的等等。 最后祝你试验顺利。 |
8楼2011-11-18 12:49:13
sl35537417
木虫 (正式写手)
- 应助: 36 (小学生)
- 金币: 1204.7
- 散金: 148
- 红花: 3
- 帖子: 396
- 在线: 225.1小时
- 虫号: 381094
- 注册: 2007-05-24
- 专业: 神经生物学
2楼2011-11-13 20:31:54
kokia
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2054.2
- 散金: 1168
- 红花: 5
- 帖子: 216
- 在线: 65.3小时
- 虫号: 482988
- 注册: 2007-12-26
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
3楼2011-11-13 22:09:13
shenxing325
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 102.5
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 26.8小时
- 虫号: 1334715
- 注册: 2011-06-30
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2011-11-14 09:00:47
200