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shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 急!蛋白截短表达不成功~

情况是这样的:我本来要表达一个蛋白,但是由于比较大,不容易表达(也是没做出来),因此我就选N末端(疏水性)进行表达。因为这一段前面还有信号肽,因此把这一段截出来的话我就人为在前面加上ATG以及在后面加上TGA。现在经过测序已经正确的连接到表达载体上了,但是还是没有表达(用SDS-PAGE作为检测手段),各位有做过蛋白截短表达嘛?请帮忙找一下原因,谢谢!!也做了比较久了,各位帮帮忙~~
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AnkeyGO

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主用何种方法破碎细胞?建议用超声波破碎
9楼2011-11-18 18:44:53
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sl35537417

木虫 (正式写手)

没有表达还是形成包涵体?
2楼2011-11-13 20:31:54
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kokia

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励交流! 2011-11-14 16:41:06
基因来源和宿主表达系统可能不匹配。有时候也是没办法,我一个师弟做过这个,分了三段,两段表达,一段不表达。我们实验室表达系统较少,所以没有继续做,你可以试一下别的表达系统,或者载体,宿主换几种试一下。
3楼2011-11-13 22:09:13
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sl35537417 at 2011-11-13 20:31:54:
没有表达还是形成包涵体?

就直接将菌体煮裂上样的,所以应该是没有表达
4楼2011-11-14 09:00:47
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