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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 急！蛋白截短表达不成功~
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 急！蛋白截短表达不成功~

情况是这样的：我本来要表达一个蛋白，但是由于比较大，不容易表达（也是没做出来），因此我就选N末端（疏水性）进行表达。因为这一段前面还有信号肽，因此把这一段截出来的话我就人为在前面加上ATG以及在后面加上TGA。现在经过测序已经正确的连接到表达载体上了，但是还是没有表达（用SDS-PAGE作为检测手段），各位有做过蛋白截短表达嘛？请帮忙找一下原因，谢谢！！也做了比较久了，各位帮帮忙~~
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1楼 2011-11-13 20:11:32
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AnkeyGO

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主用何种方法破碎细胞？建议用超声波破碎
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9楼2011-11-18 18:44:53
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sl35537417

木虫 (正式写手)
没有表达还是形成包涵体？
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2楼2011-11-13 20:31:54
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kokia

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流！ 2011-11-14 16:41:06
基因来源和宿主表达系统可能不匹配。有时候也是没办法，我一个师弟做过这个，分了三段，两段表达，一段不表达。我们实验室表达系统较少，所以没有继续做，你可以试一下别的表达系统，或者载体，宿主换几种试一下。
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3楼2011-11-13 22:09:13
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sl35537417 at 2011-11-13 20:31:54:
没有表达还是形成包涵体？

就直接将菌体煮裂上样的，所以应该是没有表达
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4楼2011-11-14 09:00:47
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