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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达量少 怎么办

最近在做一个酶的表达纯化,蛋白大小在24KD,相对与另外一个较大的蛋白来说,很难表达,最近在PET-32a上面表达出来了,但是表达量很少,各位知道怎么可以改进蛋白的表达量呢?求助各位帮帮分析一下。
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 17:59:30
yanfeier(金币+1): 2011-08-05 15:04:59
不能表达的话换表达系统,能表达了优化表达条件,比如诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间等。
2楼2011-07-04 11:56:46
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yanfeier

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-04 11:56:46:
不能表达的话换表达系统,能表达了优化表达条件,比如诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间等。

但是我的现在表达了,而且是可溶性的  ,不是在包涵体的时候可以优化条件得到可溶的吗?问题是我的现在表达的量很少 ,一过柱纯化就没有了,很是头疼
3楼2011-07-04 14:28:18
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 17:59:50
yanfeier(金币+2): 2011-07-08 10:36:49
yanfeier(金币+1): 2011-08-05 15:05:08
引用回帖:
Originally posted by yanfeier at 2011-07-04 14:28:18:
但是我的现在表达了,而且是可溶性的  ,不是在包涵体的时候可以优化条件得到可溶的吗?问题是我的现在表达的量很少 ,一过柱纯化就没有了,很是头疼

优化不只针对是不是可溶的,也可以优化表达量的。
4楼2011-07-04 15:20:01
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yanfeier

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-04 15:20:01:
优化不只针对是不是可溶的,也可以优化表达量的。

恩 ,那以你们的经验,在表达量少的情况下,优化条件,那在诱导剂,时间,温度等方面是怎么样的呢?比如说减少诱导剂的量还是增加,时间加长等等?还是因酶而异呢?谢谢
5楼2011-07-04 15:36:46
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nickychen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


dhd997(金币+1): 对 2011-07-04 18:00:15
你先确定下,你的目的蛋白是否对宿主细胞有毒性。
6楼2011-07-04 16:39:04
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trees2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎多来交流 2011-07-04 18:00:05
yanfeier(金币+1): 2011-08-05 15:05:24
优化条件:   时间 , 摇瓶大小, iptg浓度, 温度等。
学历是铜牌,能力是银牌,人脉是金牌,idea是王牌
7楼2011-07-04 17:00:34
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 对! 2011-07-06 21:07:28
引用回帖:
Originally posted by yanfeier at 2011-07-04 15:36:46:
恩 ,那以你们的经验,在表达量少的情况下,优化条件,那在诱导剂,时间,温度等方面是怎么样的呢?比如说减少诱导剂的量还是增加,时间加长等等?还是因酶而异呢?谢谢

没有明显规律可循,正如你说的因酶而异。
8楼2011-07-04 17:44:04
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-07-06 21:07:36
分析一下是否有稀有密码子,考虑用一下 Rosetta 之类的表达宿主吧
9楼2011-07-04 18:03:50
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yanfeier

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by nnxqwei at 2011-07-04 18:03:50:
分析一下是否有稀有密码子,考虑用一下 Rosetta 之类的表达宿主吧

关于稀有密码子的问题已经换宿主了,由一开始不的不表达转为表达了,但是现在的问题是表达量好少呀 ,好愁人
10楼2011-07-06 20:42:29
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