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yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达量少 怎么办

最近在做一个酶的表达纯化，蛋白大小在24KD，相对与另外一个较大的蛋白来说，很难表达，最近在PET-32a上面表达出来了，但是表达量很少，各位知道怎么可以改进蛋白的表达量呢？求助各位帮帮分析一下。
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1楼 2011-07-04 10:19:03
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 17:59:30
yanfeier(金币+1): 2011-08-05 15:04:59
不能表达的话换表达系统，能表达了优化表达条件，比如诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间等。
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2楼2011-07-04 11:56:46
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yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-04 11:56:46:
不能表达的话换表达系统，能表达了优化表达条件，比如诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间等。

但是我的现在表达了，而且是可溶性的  ，不是在包涵体的时候可以优化条件得到可溶的吗？问题是我的现在表达的量很少 ，一过柱纯化就没有了，很是头疼
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3楼2011-07-04 14:28:18
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 17:59:50
yanfeier(金币+2): 2011-07-08 10:36:49
yanfeier(金币+1): 2011-08-05 15:05:08
引用回帖:
Originally posted by yanfeier at 2011-07-04 14:28:18:
但是我的现在表达了，而且是可溶性的  ，不是在包涵体的时候可以优化条件得到可溶的吗？问题是我的现在表达的量很少 ，一过柱纯化就没有了，很是头疼

优化不只针对是不是可溶的，也可以优化表达量的。
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4楼2011-07-04 15:20:01
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yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-04 15:20:01:
优化不只针对是不是可溶的，也可以优化表达量的。

恩 ，那以你们的经验，在表达量少的情况下，优化条件，那在诱导剂，时间，温度等方面是怎么样的呢？比如说减少诱导剂的量还是增加，时间加长等等？还是因酶而异呢？谢谢
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5楼2011-07-04 15:36:46
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nickychen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
dhd997(金币+1): 对 2011-07-04 18:00:15
你先确定下，你的目的蛋白是否对宿主细胞有毒性。
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6楼2011-07-04 16:39:04
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trees2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎多来交流 2011-07-04 18:00:05
yanfeier(金币+1): 2011-08-05 15:05:24
优化条件:   时间 ， 摇瓶大小， iptg浓度， 温度等。
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学历是铜牌，能力是银牌，人脉是金牌，idea是王牌
7楼2011-07-04 17:00:34
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 对！ 2011-07-06 21:07:28
引用回帖:
Originally posted by yanfeier at 2011-07-04 15:36:46:
恩 ，那以你们的经验，在表达量少的情况下，优化条件，那在诱导剂，时间，温度等方面是怎么样的呢？比如说减少诱导剂的量还是增加，时间加长等等？还是因酶而异呢？谢谢

没有明显规律可循，正如你说的因酶而异。
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8楼2011-07-04 17:44:04
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-07-06 21:07:36
分析一下是否有稀有密码子，考虑用一下 Rosetta 之类的表达宿主吧
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9楼2011-07-04 18:03:50
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yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by nnxqwei at 2011-07-04 18:03:50:
分析一下是否有稀有密码子，考虑用一下 Rosetta 之类的表达宿主吧

关于稀有密码子的问题已经换宿主了，由一开始不的不表达转为表达了，但是现在的问题是表达量好少呀 ，好愁人
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10楼2011-07-06 20:42:29
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