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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量 已有13人参与

宿主菌：BL21（DE3)
表达载体：PET-28a
目的蛋白：63KD
IPTG：终浓度为1mM
诱导温度是：37度
转速：200rmp
请大家多多指教，做了好几次都没有见效果。
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1楼 2010-08-02 11:03:06
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换个其他的PET载体试试
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2楼2010-08-02 13:23:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流u 2010-08-02 17:43:18
降低IPTG浓度和诱导温度，增加诱导时间试下
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3楼2010-08-02 14:21:23
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-08-02 20:52:39
你的温度太高了吧，降低一下试一试？还有转速也降一下
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4楼2010-08-02 18:45:51
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
问题解决了麻烦说一声啊，我也要做呢。谢谢啦。
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5楼2010-08-02 20:44:03
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dcb005

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):欢迎交流！ 2010-08-02 21:40:30
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
6楼2010-08-02 21:17:21
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

xiexie !

引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:17:21:
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系

你说的是不是上清和沉淀都得用SDS-PAGE检测呢？还有怎么看基因信号肽？信号肽和蛋白分泌到胞外有关系吗啊？TCA是什么意思？
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7楼2010-08-03 09:09:33
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是载体问题，拿去把载体测序，看看是不是，我以前做过没表达出来，都是再提问题，
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快乐家族
8楼2010-08-03 09:29:23
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liouwzh

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主可以优化IPTG及培养温度。培养温度有点高，诱导温度一般是低于37度，有30度，25度，甚至是16度等。
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9楼2010-08-03 09:30:29
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:17:21:
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系

我查了一下我的基因中有信号肽，分泌到哪我还没有查到，请指教。
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10楼2010-08-03 09:43:57
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