应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量
231/3返回列表123下一页
查看: 1766  |  回复: 22
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量已有13人参与

宿主菌：BL21（DE3)
表达载体：PET-28a
目的蛋白：63KD
IPTG：终浓度为1mM
诱导温度是：37度
转速：200rmp
请大家多多指教，做了好几次都没有见效果。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2010-08-02 11:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxyyzz

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换个其他的PET载体试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-08-02 13:23:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流u 2010-08-02 17:43:18
降低IPTG浓度和诱导温度，增加诱导时间试下
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-08-02 14:21:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-08-02 20:52:39
你的温度太高了吧，降低一下试一试？还有转速也降一下
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-08-02 18:45:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
问题解决了麻烦说一声啊，我也要做呢。谢谢啦。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-08-02 20:44:03
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):欢迎交流！ 2010-08-02 21:40:30
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系
赞一下(2人) 回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
6楼2010-08-02 21:17:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎亚丽

新虫 (小有名气)

xiexie !

引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:17:21:
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系

你说的是不是上清和沉淀都得用SDS-PAGE检测呢？还有怎么看基因信号肽？信号肽和蛋白分泌到胞外有关系吗啊？TCA是什么意思？
赞一下 回复此楼
7楼2010-08-03 09:09:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是载体问题，拿去把载体测序，看看是不是，我以前做过没表达出来，都是再提问题，
赞一下(1人) 回复此楼
快乐家族
8楼2010-08-03 09:29:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liouwzh

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主可以优化IPTG及培养温度。培养温度有点高，诱导温度一般是低于37度，有30度，25度，甚至是16度等。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-08-03 09:30:29
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:17:21:
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系

我查了一下我的基因中有信号肽，分泌到哪我还没有查到，请指教。
赞一下 回复此楼
10楼2010-08-03 09:43:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 黎亚丽 的主题更新
231/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件) 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 这个博士要读吗 +14 Sea Breeze 2024-06-16 24/1200 2024-06-20 09:25 by QHJ100100
[基金申请] 2024国社科通讯评审 +21 qsd10086 2024-06-13 44/2200 2024-06-20 09:22 by 全球漂
[基金申请] 面青地会评时间？？？ +6 Axvdvbfs 2024-06-19 7/350 2024-06-20 09:12 by 蜕变123~
[论文投稿] 有化学投稿的期刊推荐吗 20+3 荣小撇 2024-06-13 4/200 2024-06-20 08:24 by 1975632963
[基金申请] F03青年基金函评结果 +3 暨阳一只柴 2024-06-19 3/150 2024-06-20 06:55 by kobe0107
[考博] 2025年博士申请，可先做科研助理 +3 limit888 2024-06-18 6/300 2024-06-20 02:43 by limit888
[基金申请] 75批博后基金 +11 kyukitu 2024-06-13 14/700 2024-06-19 18:44 by Siuhong Yiu
[基金申请] 面上博士后 +3 jsqy 2024-06-19 3/150 2024-06-19 17:58 by bxwisdom_886
[基金申请] 基金得中 +4 woaini0218 2024-06-18 4/200 2024-06-19 17:27 by mengzl
[访问学者] 国家公派访问学者申请结果出了吗？ +4 65syn 2024-06-13 4/200 2024-06-19 16:40 by 海洋之心168
[基金申请] Nature 11日发文，中国著名学者们称造假迫不得已 +8 babu2015 2024-06-14 8/400 2024-06-19 15:25 by 风今25
[论文投稿] 求机械类四区sci推荐 5+4 迷茫小旷 2024-06-14 5/250 2024-06-19 14:08 by tangjie12345
[教师之家] 试用期辞职 +9 ZHONGWU_U 2024-06-18 14/700 2024-06-19 12:36 by ZHONGWU_U
[论文投稿] 审稿人含糊拒稿，还需要回复吗？如何回复？ 20+4 BruceChum 2024-06-15 22/1100 2024-06-19 08:00 by kanyechris
[基金申请] 有人中过人文社科类的博后特助吗？ +3 outsider1986 2024-06-16 5/250 2024-06-18 11:10 by 袁天未然
[论文投稿] 审稿问题：为什么荧光激发波长和紫外吸收波长差的大？ 10+5 sdawege 2024-06-14 10/500 2024-06-17 18:54 by HH-探针
[基金申请] 面青地会评时间 +8 tanjydd 2024-06-15 8/400 2024-06-17 17:08 by 小龙虾2008
[基金申请] 关于博后基金的bug问题 +6 lxr1991 2024-06-14 9/450 2024-06-15 21:17 by since—2010
[论文投稿] 投了一篇4区的SCI，审稿人一个拒稿，一个小修，编辑给了大修。 +9 安稳22123 2024-06-13 10/500 2024-06-14 23:45 by jurkat.1640
[考博] 申博找导师 +4 疏影横斜水清浅3 2024-06-13 6/300 2024-06-14 14:31 by zxl_1105
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭