Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:17:21:
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系

Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:17:21:
楼主做的是最适条件，不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里，若上清包涵体都没有，考虑一下你的基因有没有信号肽，会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有，就是基因问题，换表达体系

Originally posted by hyw1989960 at 2010-08-03 09:29:23:
是不是载体问题，拿去把载体测序，看看是不是，我以前做过没表达出来，都是再提问题，

Originally posted by liouwzh at 2010-08-03 09:30:29:
楼主可以优化IPTG及培养温度。培养温度有点高，诱导温度一般是低于37度，有30度，25度，甚至是16度等。

Originally posted by dcb005 at 2010-08-03 09:55:03:

有的蛋白可溶在上清中，有的表达量太高在包涵体中，信号肽可用singnal P预测，TCA是浓缩蛋白的方法，比如要是分泌到胞外，培养基太多，蛋白PAGE根本看不出来，需要浓缩再测蛋白

Originally posted by 月月大可 at 2010-08-04 21:25:57:
换用营养成分更加丰富的培养基譬如2*YT
16g蛋白胨
10g酵母粉
5g绿化纳
pH7.0

Originally posted by xinyaolu at 2010-08-06 10:31:41:
不知楼主有没有测序。建议楼主测序确认序列无移码，有完整正确的读码框，无突变的情况下。可以再尝试虫友没提出的一些建议。