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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IPTG诱导
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friya0910

新虫 (正式写手)

[求助] IPTG诱导

有没有不加IPTG诱导，也能表达目的蛋白的情况存在啊？我的没加IPTG诱导培养5h的菌好像也表达我的目的蛋白了，怎么回事啊？
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1楼 2011-09-01 18:58:32
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howoosoe

铁虫 (初入文坛)
★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-09-13 11:53:30
同问

我也一样，1月前表达的，未加IPTG的无条带，加入IPTG的有条带，效果很好。
刚刚拿到诱导结果，发现未加IPTG的和加入的SDS-PAGE一样，都有目的蛋白条带。

总结了网上的说法：

1.IPTG残留。其不被细菌代谢，而且我的接种量很大，200ul接种5ml。

2.本底表达。细菌产生了IPTG的类似物，就是半乳糖什么的，导致未加IPTG也表达。

3.菌浓度太高的时候加入了IPTG，可能由于第一条，这样，细菌本身有本地表达，摇的时间很长的时候，本底表达高，而在OD值高的时候加入IPTG后，表达量会降低，所以在SDS-PAGE上显示差不多
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9楼2011-09-13 10:40:49
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普通回帖

blackrose8089
2楼2011-09-01 19:01:13
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

friya0910(金币+1): 2011-09-01 19:23:03
如果可以的话那就最好了，不过一般都是要IPTG诱导的。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-09-01 19:20:46
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
friya0910(金币+1): 2011-09-01 19:31:00
dhd997(金币+3): good 2011-09-02 07:00:33
1、在没有IPTG诱导剂存在的情况下，细菌本身当然还是会表达自身蛋白的，但是量比较低；
2、IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质，在它的诱导下乳糖被催化形成半乳糖，使lac操纵子处于激活状态，从而大量的转录表达目的基因；
3、IPTG对细菌有一定的毒害作用，一般使用浓度为1mM/ml.
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
4楼2011-09-01 19:28:13
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 天使托 at 2011-09-01 19:20:46:
如果可以的话那就最好了，不过一般都是要IPTG诱导的。。。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3538745
上面有我跑的全菌蛋白的图，麻烦您帮我看看，这图能说明我的蛋白表达了吗？这图没跑未加IPTG的菌培养5h的情况，我今天跑的上清和沉淀，发现未加IPTG的菌培养5h后上清中都有我的目的蛋白，于是我就困惑了……等脱完色把图传上来让您帮我看看，成吗？
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5楼2011-09-01 19:30:36
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

amisking: 2011-09-01 19:49:17
引用回帖:
5楼: Originally posted by friya0910 at 2011-09-01 19:30:36:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3538745
上面有我跑的全菌蛋白的图，麻烦您帮我看看，这图能说明我的蛋白表达了吗？这图没跑未加IPTG的菌培养5h的情况，我今天跑的上清和沉淀，发现未加IP ...

其实要确定是不是，你可以不加IPTG表达一下，然后添加不同浓度的IPTG再诱导一下，然后PAGE一下就可以看出来了。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-09-01 19:42:54
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天使托 at 2011-09-01 19:42:54:
其实要确定是不是，你可以不加IPTG表达一下，然后添加不同浓度的IPTG再诱导一下，然后PAGE一下就可以看出来了。。。

恩……我也打算把之前未诱导的培养5h的全菌蛋白跑一下，看看到底是什么情况，如果我未诱导的也能在目的蛋白的位置跑出比较亮的带，这个带还能确定是我的目的条带吗？是不是也有可能是菌的某个蛋白啊？
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7楼2011-09-01 20:18:27
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Diacetyl

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 再接再厉、 2011-09-02 07:00:58
friya0910(金币+2): 2011-09-04 14:59:15
最近准备做pET系统的表达，查了一些资料。发现pET的诱导表达有两种情况：①监测OD值，0.5~0.6时添加IPTG的诱导，②使用自诱导培养基。 关于自诱导培养基，你可以看一下这个帖子：”PET系统蛋白表达自动诱导培养基、大幅度提高产量“，在很多网站上有转载。
对于你的问题，这篇帖子中有描述：【但为了解决表达型质粒的自发诱导的问题（就是不加诱导剂，菌液摇到饱和时总有目的蛋白自动表达的问题，这也是有毒蛋白不能表达的原因），他彻底研究了培养基的每一种组分，最后发现是胰蛋白胨里的少量的乳糖在作怪，他同时又发现了葡萄糖，和氨基酸能抑止乳糖的诱导，在培养基的研究中，他发明了全新的培养基组分，在这种培养基里，菌液的OD值很简单的就能达到5－50左右，在此基础上，他发明了自动诱导系统。】

自诱导培养基，studier文献中的配方感觉太复杂，尤其18 种aa。 我再网上找到了中简单的配方，组成：

Autoclave                                      /1L
      - Phosphate Buffer (pH 7.2)          6g Na2HPO4/3g KH2PO4
      - Tryptone                                        20 g
      - Yeast Extract                                         5 g
      - NaCl                                                 5 g

Filter sterilise
     - 60 % v/v Glycerol                               10 ml
     - 10 % w/v Glucose                                5 ml
     -   8 % w/v Lactose                               25 ml

我要等两天做表达， 对于这个配方不知道你有没有兴趣， 有兴趣的话，可以交流一下此配方的 表达效果。
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8楼2011-09-01 21:08:47
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

friya0910(金币+6): 2011-09-18 14:14:55
可以表达的，这个叫泄露表达
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10楼2011-09-17 22:54:15
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