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Diacetyl

铁虫 (初入文坛)

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虫号: 1363121
注册: 2011-08-08
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 再接再厉、 2011-09-02 07:00:58
friya0910(金币+2): 2011-09-04 14:59:15

最近准备做pET系统的表达，查了一些资料。发现pET的诱导表达有两种情况：①监测OD值，0.5~0.6时添加IPTG的诱导，②使用自诱导培养基。关于自诱导培养基，你可以看一下这个帖子：”PET系统蛋白表达自动诱导培养基、大幅度提高产量“，在很多网站上有转载。
对于你的问题，这篇帖子中有描述：【但为了解决表达型质粒的自发诱导的问题（就是不加诱导剂，菌液摇到饱和时总有目的蛋白自动表达的问题，这也是有毒蛋白不能表达的原因），他彻底研究了培养基的每一种组分，最后发现是胰蛋白胨里的少量的乳糖在作怪，他同时又发现了葡萄糖，和氨基酸能抑止乳糖的诱导，在培养基的研究中，他发明了全新的培养基组分，在这种培养基里，菌液的OD值很简单的就能达到5－50左右，在此基础上，他发明了自动诱导系统。】

自诱导培养基，studier文献中的配方感觉太复杂，尤其18 种aa。我再网上找到了中简单的配方，组成：

Autoclave       /1L
   - Phosphate Buffer (pH 7.2)    6g Na2HPO4/3g KH2PO4
   - Tryptone          20 g
   - Yeast Extract          5 g
   - NaCl          5 g

Filter sterilise
   - 60 % v/v Glycerol          10 ml
   - 10 % w/v Glucose          5 ml
   - 8 % w/v Lactose          25 ml

我要等两天做表达，对于这个配方不知道你有没有兴趣，有兴趣的话，可以交流一下此配方的表达效果。

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8楼2011-09-01 21:08:47

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