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Diacetyl

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 再接再厉、 2011-09-02 07:00:58
friya0910(金币+2): 2011-09-04 14:59:15
最近准备做pET系统的表达,查了一些资料。发现pET的诱导表达有两种情况:①监测OD值,0.5~0.6时添加IPTG的诱导,②使用自诱导培养基。 关于自诱导培养基,你可以看一下这个帖子:”PET系统蛋白表达自动诱导培养基、大幅度提高产量“,在很多网站上有转载。
对于你的问题,这篇帖子中有描述:【但为了解决表达型质粒的自发诱导的问题(就是不加诱导剂,菌液摇到饱和时总有目的蛋白自动表达的问题,这也是有毒蛋白不能表达的原因),他彻底研究了培养基的每一种组分,最后发现是胰蛋白胨里的少量的乳糖在作怪,他同时又发现了葡萄糖,和氨基酸能抑止乳糖的诱导,在培养基的研究中,他发明了全新的培养基组分,在这种培养基里,菌液的OD值很简单的就能达到5-50左右,在此基础上,他发明了自动诱导系统。】

自诱导培养基,studier文献中的配方感觉太复杂,尤其18 种aa。 我再网上找到了中简单的配方,组成:

Autoclave                                      /1L
      - Phosphate Buffer (pH 7.2)          6g Na2HPO4/3g KH2PO4
      - Tryptone                                        20 g
      - Yeast Extract                                         5 g
      - NaCl                                                 5 g

Filter sterilise
     - 60 % v/v Glycerol                               10 ml
     - 10 % w/v Glucose                                5 ml
     -   8 % w/v Lactose                               25 ml

我要等两天做表达, 对于这个配方不知道你有没有兴趣, 有兴趣的话,可以交流一下此配方的 表达效果。
8楼2011-09-01 21:08:47
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