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friya0910新虫 (正式写手)
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[求助]
IPTG诱导
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| 有没有不加IPTG诱导，也能表达目的蛋白的情况存在啊？我的没加IPTG诱导培养5h的菌好像也表达我的目的蛋白了，怎么回事啊？ |
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西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-09-13 11:53:30
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-09-13 11:53:30
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同问 我也一样，1月前表达的，未加IPTG的无条带，加入IPTG的有条带，效果很好。 刚刚拿到诱导结果，发现未加IPTG的和加入的SDS-PAGE一样，都有目的蛋白条带。 总结了网上的说法： 1.IPTG残留。其不被细菌代谢，而且我的接种量很大，200ul接种5ml。 2.本底表达。细菌产生了IPTG的类似物，就是半乳糖什么的，导致未加IPTG也表达。 3.菌浓度太高的时候加入了IPTG，可能由于第一条，这样，细菌本身有本地表达，摇的时间很长的时候，本底表达高，而在OD值高的时候加入IPTG后，表达量会降低，所以在SDS-PAGE上显示差不多 |
9楼2011-09-13 10:40:49
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
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3楼2011-09-01 19:20:46
xbl3688
银虫 (正式写手)
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4楼2011-09-01 19:28:13
friya0910
新虫 (正式写手)
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http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3538745 上面有我跑的全菌蛋白的图，麻烦您帮我看看，这图能说明我的蛋白表达了吗？这图没跑未加IPTG的菌培养5h的情况，我今天跑的上清和沉淀，发现未加IPTG的菌培养5h后上清中都有我的目的蛋白，于是我就困惑了……等脱完色把图传上来让您帮我看看，成吗？ |
5楼2011-09-01 19:30:36
10