原核表达 PET-30载体目的蛋白分子量偏小？ - 分子生物 - 综合其他

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+3): 鼓励 2012-03-02 21:27:46

目的蛋白要比预测的小4kD左右（目的条带约55kD）如果SDS-PAGE结果的话也不能说明真的小，SDS-PAGE出来的只是表观分子量，不是真实分子量。如果不符，可以利用质谱、凝胶排阻等确认。

赞一下(1人)

2楼2012-03-01 19:47:37

普通回帖

zzjzheng

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

3楼2012-03-01 20:52:57

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+1): 鼓励讨论 2012-03-02 21:28:07
zzjzheng(金币+2): 2012-03-03 16:06:23

引用回帖:

3楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-01 20:52:57:
这个质谱是不是跟分析化合物质谱差不多啊？凝胶排阻需要哪些东西啊？我们这条件有限，以前师兄师姐都不怎么做分子，所以对这方面了解较少……

有点不一样，是飞行质谱。
质谱和凝胶排阻都要蛋白纯化后做，凝胶排阻就是凝胶过滤，需要一些已知分子量的蛋白做为标准。

4楼2012-03-01 21:07:43

gaohuijy

银虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 493.1
帖子: 174
在线: 355.9小时
虫号: 1309164

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

楼主的那个预测蛋白分子量是怎么预测啊

5楼2012-03-02 21:24:05

zzjzheng

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

6楼2012-03-03 12:16:43

zzjzheng

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

7楼2012-03-03 12:19:24

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

7楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-03 12:19:24:
这位仁兄，你看电泳跑出的结果跟网上预测结果相差4kD~5kD,这属于正常范围吗？？？

正常，但最好别的方法验证下。

8楼2012-03-03 13:51:47

zzjzheng

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

9楼2012-03-03 16:05:13

zhouzejun202

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 506.5
帖子: 56
在线: 111.9小时
虫号: 1331425

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

诱导表达后马上跑电泳。

10楼2012-03-03 16:30:10

zzjzheng

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

11楼2012-03-03 18:11:19

zzjzheng

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

12楼2012-03-03 19:59:25

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

12楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-03 19:59:25:
兄台，你看我这个分析的对不对，我的上样缓冲液里没有加β-巯基乙醇，但是目的蛋白氨基酸序列里含有半胱氨酸，是不是会形成二硫键使目的蛋白没有完全打开，最终导致跑出来的条带偏小？？？

如果是分子间形成二硫键，形成二聚体或多聚体，分子量会偏大；如果是分子内形成二硫键，分子量不变。

13楼2012-03-03 20:27:57