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zzjzheng

禁虫 (正式写手)

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1949stone(金币+3): 鼓励 2012-03-02 21:27:46
目的蛋白要比预测的小4kD左右(目的条带约55kD)如果SDS-PAGE结果的话也不能说明真的小,SDS-PAGE出来的只是表观分子量,不是真实分子量。如果不符,可以利用质谱、凝胶排阻等确认。
2楼2012-03-01 19:47:37
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zzjzheng

禁虫 (正式写手)

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3楼2012-03-01 20:52:57
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1949stone(金币+1): 鼓励讨论 2012-03-02 21:28:07
zzjzheng(金币+2): 2012-03-03 16:06:23
引用回帖:
3楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-01 20:52:57:
这个质谱是不是跟分析化合物质谱差不多啊?凝胶排阻需要哪些东西啊?我们这条件有限,以前师兄师姐都不怎么做分子,所以对这方面了解较少……

有点不一样,是飞行质谱。
质谱和凝胶排阻都要蛋白纯化后做,凝胶排阻就是凝胶过滤,需要一些已知分子量的蛋白做为标准。
4楼2012-03-01 21:07:43
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gaohuijy

银虫 (小有名气)



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楼主的那个预测蛋白分子量是怎么预测啊
5楼2012-03-02 21:24:05
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zzjzheng

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6楼2012-03-03 12:16:43
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zzjzheng

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7楼2012-03-03 12:19:24
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引用回帖:
7楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-03 12:19:24:
这位仁兄,你看电泳跑出的结果跟网上预测结果相差4kD~5kD,这属于正常范围吗???

正常,但最好别的方法验证下。
8楼2012-03-03 13:51:47
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zzjzheng

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9楼2012-03-03 16:05:13
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zhouzejun202

金虫 (小有名气)



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诱导表达后马上跑电泳。
10楼2012-03-03 16:30:10
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zzjzheng

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11楼2012-03-03 18:11:19
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zzjzheng

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12楼2012-03-03 19:59:25
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引用回帖:
12楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-03 19:59:25:
兄台,你看我这个分析的对不对,我的上样缓冲液里没有加β-巯基乙醇,但是目的蛋白氨基酸序列里含有半胱氨酸,是不是会形成二硫键使目的蛋白没有完全打开,最终导致跑出来的条带偏小???

如果是分子间形成二硫键,形成二聚体或多聚体,分子量会偏大;如果是分子内形成二硫键,分子量不变。
13楼2012-03-03 20:27:57
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a731705125

银虫 (小有名气)



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引用回帖:
13楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-03-03 20:27:57:
如果是分子间形成二硫键,形成二聚体或多聚体,分子量会偏大;如果是分子内形成二硫键,分子量不变。

学习了,不过分子形状对分子量大小也有影响吧,分子内形成二硫键应该体积变小,是不是分子量要相对小些?
14楼2012-03-03 20:58:46
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引用回帖:
14楼: Originally posted by a731705125 at 2012-03-03 20:58:46:
学习了,不过分子形状对分子量大小也有影响吧,分子内形成二硫键应该体积变小,是不是分子量要相对小些?

对,所以最好验证下。
15楼2012-03-03 23:05:46
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Jathan

新虫 (小有名气)



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看虫友们回帖,长了不少知识啊~
16楼2013-03-27 16:48:49
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chenxiang29

银虫 (正式写手)



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我最近也出现了这种问题,请问楼主现在找到原因了么
17楼2013-05-06 21:52:55
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lihuahan

银虫 (初入文坛)



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你好,正在做原核表达,想请问一下表达载体应该怎么选择尼?后期是要用纯化目的蛋白做抗体的,pET-22,pET-28,pET-30,我应该怎么选择尼?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
18楼2014-04-30 19:43:27
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zbblpp

新虫 (初入文坛)



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最近做表达,也出现了这个问题。蛋白一部分上清表达,一部分包涵体,上清为20KD,包涵体尿素溶解后只有14.用的PET28A载体,测序没有问题,实在不知道什么原因了
19楼2014-08-01 23:20:43
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