应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
301/3返回列表123下一页
查看: 3550  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

泡泡9706

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】原核表达蛋白纯化 已有15人参与

在大肠杆菌BL21中表达了一个酶，产生包涵体，优化后可以产生有活性的该酶。镍柱纯化时在目的条带附近总伴随有另一条带（或者多条），用了离子交换除不去，而且也不知道哪条是我的目的条带。有图

请高人指教有何办法将其分纯？
  另外：包涵体蛋白和胞内上清中的目的蛋白跑SDS-PAGE时，条带一定在同一位置出现吗？

[ Last edited by 泡泡9706 on 2010-6-13 at 11:13 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-12 17:02:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-06-12 21:18:40
泡泡9706(金币+1):这样啊，谢谢！ 2010-06-13 08:32:50
包涵体蛋白和胞内上清中的目的蛋白跑SDS-PAGE时，目的条带一般是相同位置的，不过你这个纯化不容易，帮顶一下
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-06-12 17:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:04
泡泡9706(金币+1):多谢指教 2010-06-17 17:03:47
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 17:05:51
可能都是，信号肽的有无，原核么，很可能有的把信号肽切了，有的没有切，或者二者都存在，你查下外文文献，有说的，希望对你有帮助~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-06-13 16:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑罕

金虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:11
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:57
泡泡9706(金币+1):做了western，用的his标签的抗体，都能染出来……据说国产的抗体特异性不好…… 2010-06-17 17:04:28
做wester blot 鉴定出你的条带，如果还不行就只能做质谱了
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-06-13 18:35:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zemin_fang

木虫 (正式写手)
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 17:06:26
貌似不容易分开，分子筛估计都难
赞一下 回复此楼
5楼2010-06-13 20:04:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mazhenning

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:29
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:51
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 17:06:34
有没有重复一下，都是接近的两条带吗？
我之前也有过同一种蛋白，但是跑出来会有两条紧挨的带，不过我那种情况是蛋白电泳的问题。所以，也许你这两条带都是你的目标蛋白。或者是电泳条件，或者是被分解等原因，导致成了两条带。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-06-13 20:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 17:07:35
western 检测看看！
赞一下 回复此楼
7楼2010-06-13 20:22:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by mazhenning at 2010-06-13 20:13:15:
有没有重复一下，都是接近的两条带吗？
我之前也有过同一种蛋白，但是跑出来会有两条紧挨的带，不过我那种情况是蛋白电泳的问题。所以，也许你这两条带都是你的目标蛋白。或者是电泳条件，或者是被分解等原因，导 ...

我想问一下楼主，蛋白电泳出现什么问题会出现两条紧挨的带呢？
赞一下 回复此楼
8楼2010-06-14 19:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:43
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 17:07:49
你表达的酶基因是不是含有信号肽序列？如果有，可能该信号肽在大肠杆菌胞内可溶表达部分被切去了信号肽，而包涵体表达部分没有被切去信号肽，这样导致了出现这两条吧！如果有该酶的抗体，你做一下western blot检测，如果两条都与抗体结合并显带，就可能是我说的这个原因！
赞一下(1人) 回复此楼
大家共同交流、共同提高！！！
9楼2010-06-15 00:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-15 13:27:07
泡泡9706(金币+1): 2010-06-17 17:08:00
怀疑是构象不同引起的。
想问楼主离子交换柱洗脱峰的对称性如何？  
另外检查目的蛋白中半胱氨酸的个数。如果有两个以上，蛋白纯化过程中是否全程加的有还原剂？
电泳的时候使用的 Loading buffer 中是否加入还原剂，如果目的蛋白中确实存在二硫键，加不加还原剂电泳结果确实会存在差异。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-06-15 08:46:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 泡泡9706 的主题更新
301/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学363调剂求助 +5 fanzhang6666 2026-04-06 6/300 2026-04-07 11:13 by 好运来2024
[考研] 一志愿西南090202求调剂 +3 在线求有学上 2026-04-07 3/150 2026-04-07 10:24 by kk112233
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +6 努力奋斗112 2026-04-06 6/300 2026-04-07 09:50 by dongzh2009
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9，326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 专硕0854初试考材科基，求调剂 +6 3220548044 2026-04-06 9/450 2026-04-06 10:26 by barlinike
[考研] 301求调剂 +6 细胞相关蛋白 2026-04-02 10/500 2026-04-06 08:34 by jp9609
[考研] 求 +5 化工专硕323分 2026-04-04 5/250 2026-04-05 08:02 by 544594351
[考研] 一志愿北京化工大学，初试成绩350求调剂 +9 沿岸?贝壳 2026-04-04 14/700 2026-04-05 01:09 by 沿岸?贝壳
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 调剂 +11 JLLLLLLLLLL 2026-04-03 11/550 2026-04-04 22:21 by hemengdong
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂，一志愿北京中医药大学 +3 小小达不溜 2026-04-02 3/150 2026-04-03 22:55 by 冲矢昴星团
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考博] 申博求助 +3 Reee1Llll 2026-04-01 3/150 2026-04-02 22:29 by 这是一个无聊的�
[考研] 348求调剂 +6 吴彦祖24k 2026-04-02 6/300 2026-04-02 14:07 by 给你你注意休息
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 350求调剂 +7 阿佳～ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭