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[交流]
【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白 已有6人参与
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| 目的蛋白的等电点是6.0左右，目的蛋白无纯化标签，我选择GE的CM-Sepharose F.F.进行纯化，pH5.1醋酸缓冲液平衡柱子和上样，然后用pH5.1醋酸缓冲液（内含0-0.5mol/L的NaCl）进行梯度洗脱，通过测定蛋白浓度，跑SDS-PAGE发现我的蛋白回收率特别低，然后我一直不知道我的蛋白跑哪里去了，后来我过完柱子后取一点柱子里的填料来煮样跑SDS-PAGE，发现原来还有很多蛋白(包括目的蛋白和杂蛋白）挂在柱子上，没有下来。我就加大了NaCl的浓度来洗脱，蛋白还是有很多下不来，请大家帮我分析下原因和提供点解决途径 谢谢。 |
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