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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 怎么分离分子伴侣和目的蛋白

如题，HPV16 L1 蛋白带有GST标签，此融合蛋白分子量为82kd, 但和分子量为60kd的GroEL 分子伴侣结合在一起，请问亲们该如何分离呢？按照文献里说的使用ATP和氯化镁，尿素的方法，融合蛋白和分子伴侣总是同时成为沉淀，愁死了，请教大家啊！
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1楼2012-04-24 17:14:27
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to-be

金虫 (正式写手)
同问！这是个很愁人的问题啊，每次纯化杂带都在哪里！
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生活是面镜子~
2楼2012-04-24 18:52:13
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consist10

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by to-be at 2012-04-24 18:52:13:
同问！这是个很愁人的问题啊，每次纯化杂带都在哪里！

呵呵 你在做什么纯化
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3楼2012-04-24 20:31:47
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to-be

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-04-24 20:31:47:
呵呵 你在做什么纯化

原核表达真菌中的蛋白，有文献报道，要加入结合分子伴侣的蛋白，把它们拉下来，效果会不错。可是工作繁琐又昂贵啊。有些很大的分子伴侣理论上可行，但实际上分子筛实际都除不掉。
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consist10
生活是面镜子~
4楼2012-04-24 21:38:23
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
consist10: 金币+3, ★★★很有帮助, O(∩_∩)O谢谢 我也看到过这个方法 以前也试过 貌似结果不好 不过在您的提醒下再次想起 再尝试一次吧 希望结果好 2012-04-25 09:06:18
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-25 13:42:06
听说，仅是听说，用可以通过上样前在50mM  Tris-HCl，2mM ATP，10mM
MgSO4，pH7.4中37°C温浴10分钟而破坏。或者把有标签蛋白通过ATP-agarose或相似的纯化介质或进行离子交换层析来除去。要不试试？
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5楼2012-04-24 22:34:19
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consist10

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by to-be at 2012-04-24 21:38:23:
原核表达真菌中的蛋白，有文献报道，要加入结合分子伴侣的蛋白，把它们拉下来，效果会不错。可是工作繁琐又昂贵啊。有些很大的分子伴侣理论上可行，但实际上分子筛实际都除不掉。

分子伴侣和目的蛋白是结合在一起的，过分子筛的话是要将其一起变性才能将分子伴侣和目的蛋白分开的，因为复性的效率低，我不想变性啊。你说的加入结合分子伴侣的蛋白，具体是怎么做的呀？能否把文献发给我借鉴一下呀，多谢啦，O(∩_∩)O~。
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6楼2012-04-25 09:01:55
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
consist10: 金币+3, ★有帮助, 邮箱mfl0729@126.com，疏水性蛋白没做过，仅做过GST和几丁质纯化。 2012-04-25 16:48:42
引用回帖:
6楼: Originally posted by consist10 at 2012-04-25 09:01:55:
分子伴侣和目的蛋白是结合在一起的，过分子筛的话是要将其一起变性才能将分子伴侣和目的蛋白分开的，因为复性的效率低，我不想变性啊。你说的加入结合分子伴侣的蛋白，具体是怎么做的呀？能否把文献发给我借鉴一 ...

QQ或邮箱给我说下。
By the way,楼主有没有做过疏水性蛋白？
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生活是面镜子~
7楼2012-04-25 14:58:34
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leilaxx

金虫 (小有名气)
你好， 我也遇到的同样的问题，请问你最后是怎样解决的啊
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8楼2016-01-18 17:06:00
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charthy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by to-be at 2012-04-25 14:58:34
QQ或邮箱给我说下。
By the way,楼主有没有做过疏水性蛋白？...

你好！请问文献能否给我也发一下？我最近也遇到了这样的问题，我的邮箱是lai414@126.com 谢谢你！！！
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9楼2019-12-22 21:45:36
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