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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么分离分子伴侣和目的蛋白
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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 怎么分离分子伴侣和目的蛋白

如题，HPV16 L1 蛋白带有GST标签，此融合蛋白分子量为82kd, 但和分子量为60kd的GroEL 分子伴侣结合在一起，请问亲们该如何分离呢？按照文献里说的使用ATP和氯化镁，尿素的方法，融合蛋白和分子伴侣总是同时成为沉淀，愁死了，请教大家啊！
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1楼2012-04-24 17:14:27
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consist10

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by to-be at 2012-04-24 21:38:23:
原核表达真菌中的蛋白，有文献报道，要加入结合分子伴侣的蛋白，把它们拉下来，效果会不错。可是工作繁琐又昂贵啊。有些很大的分子伴侣理论上可行，但实际上分子筛实际都除不掉。

分子伴侣和目的蛋白是结合在一起的，过分子筛的话是要将其一起变性才能将分子伴侣和目的蛋白分开的，因为复性的效率低，我不想变性啊。你说的加入结合分子伴侣的蛋白，具体是怎么做的呀？能否把文献发给我借鉴一下呀，多谢啦，O(∩_∩)O~。
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6楼2012-04-25 09:01:55
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to-be

金虫 (正式写手)
同问！这是个很愁人的问题啊，每次纯化杂带都在哪里！
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生活是面镜子~
2楼2012-04-24 18:52:13
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consist10

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by to-be at 2012-04-24 18:52:13:
同问！这是个很愁人的问题啊，每次纯化杂带都在哪里！

呵呵 你在做什么纯化
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3楼2012-04-24 20:31:47
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to-be

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-04-24 20:31:47:
呵呵 你在做什么纯化

原核表达真菌中的蛋白，有文献报道，要加入结合分子伴侣的蛋白，把它们拉下来，效果会不错。可是工作繁琐又昂贵啊。有些很大的分子伴侣理论上可行，但实际上分子筛实际都除不掉。
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consist10
生活是面镜子~
4楼2012-04-24 21:38:23
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